不同培养时间对NIT-1细胞胰岛素分泌及相关基因表达的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(9)．1811=1815 【文章编号] 1000—4718(2008)09—1811—05 不同培养时间对 NIT一1细胞胰岛素分泌及 相关基因表达的影响 李 英， 杨 川， 严 励 ， 傅静奕， 王 (中山大学附属第二医院内分泌科，广东 广州510120) 寄 要] 目的：研究体外生理浓度葡萄糖培养胰岛B细胞株 NIT一1细胞在不同时间出现的功能变化及其 可能机制。方法：观察5．6mmol／L葡萄糖浓度的DMEM完全培养基培养的NIT一1细胞在8周培养时间内细胞的 形态变化；胰岛素免疫细胞化学染色；应用放射免疫法测定8周葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平；并以RT—PCR半 定量测定各基因Insulin、Glut2、GK、PDX一1、NeuroD1、Pax4、Pax6mRNA表达水平变化。结果：(1)传代培养过程中 细胞生长 良好呈多边形 ，不同培养时间的NIT一1细胞形态无显著差异；(2)胰岛素免疫细胞化学染色示GSIS组胞 浆染色阳性，呈淡黄褐色；(3)1—8周每周测定的葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)与第 1周数据比较，显示胰岛细 胞分泌功能改变差异显著 (P0．05)；(4)1—8周每周测定的胰岛素基因、PDX一1基因、GK基因、Glut2基因、Neu． roD1基因和Pax6基因mRNA的表达与第 1周比较，显示基因mRNA的改变差异显著 (P0．05)；Pax4基因mRNA 的改变无显著差异(P0．05)。结论：生理浓度葡萄糖培养的NIT一1细胞的葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能随体 外培养时间的延长呈逐步下降趋势；这可能与维持B细胞功能有关的基因Insulin、PDX一1、GK、Glut2、NeumD1和 Pax6表达下降有关。 【关键词] 葡萄糖；NIT一1细胞 ；胰岛素分泌 ；基因表达 【中图分类号] R363 【文献标识码] A Effectsofculturetimeoninsulinsecretionandexpressionofrelatedgenes inNIT 一1cells LIYing，YANG Chuan，YAN Li，FU Jing—yi，WANG Chuan (DepartmentofEndocrinology，TheSecondAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China．E— mail：hfxyl@163．net) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheglucosestimulatedinsulinsecretion(GSIS)in8cellculturedinvitroand theroleofrelevanttranscriptionalfactorsintheprocess．METHODS：(1)ThemurineinsulinomacelllineNIT一1was culturedincompleteDMEM medium with5．6mmol／Lglucoseandmaintainedinroutinepassagesfor8weeks．Morpholog- icalchangeswereobservedwithinvertmicroscopy．(2)InsulinexlbressioninNIT一1cellsWasmeasuredbyimmunohisto- chemicalstaining．(3)During8weeks，theconcentrationsofinsulininsupernatantweredeterminedbyRIAafterstimula- tedwithglucose．(4)mRNAexpressionsofgenesincludinginsuli