雌二醇促人乳腺细胞株增殖及其ERβ表达.pdfVIP

维普资讯 理生理杂志 ChineseJournalofPathQP 垫(2；塑=塑 · l93 · [文章编号] 1000-4718(2007)Ol一0193—02 雌二醇促人乳腺细胞株增殖及其 ERI3I表达 刘丽军 ， 杜惠兰 ， 修贺明 ， 徐 铮 ， 靳亚慈 ， 刘京芳 (河‘北医科大学中西医结合学院，河北 石家庄050091； 河北省石家庄市白求恩国际和平医院，河北 石家庄 050082) [摘 要] 目的：观察不同浓度雌二醇 (E)对 HBL一100细胞的增殖作用及ERI3的表达。方法：用 MTr法 观察不同浓度E 处理后细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期 ，免疫组化法检测 ERI3表达。结果 ：E (0．Ol一 1~nol／L)可增强HBL一100的增殖活性 ，G。、G2／M期细胞增多，S期细胞减少；ERI3表达从胞质转至胞核。结论： E 具有促进人乳腺细胞增殖的作用，可能与ERI3重新分布有关。 [关键词] 雌二醇；乳房 ；HBL一100细胞；受体，雌二醇 [KEYWORDS] Estradiol；Breast；HBL一100cells；Receptors，estradiol [中图分类号] R363 [文献标识码] A 乳腺增生病是女性常见病 ，近年来发病呈上升趋势，在 不含E 的正常培养液培养。 我国3O岁以上妇女发病率占30％一50％，最常见于3O一5O ② 细胞周期测定 收集以上两组细胞。消化下来的细胞用 岁的妇女，有一定的致癌倾向。一些研究提示乳腺增生病人 2．5mL的PBS离心清洗 3次，将细胞混匀，再加入 2mL的 血清E 增高、孕酮降低 ，乳腺组织在 E2长期刺激下，使乳腺 70％乙醇立 即震荡混匀 ，封 口膜封 口，4℃ 冰箱保存备用。 组织不能由增生转入复旧或复旧不全而增生 0。E 是通过 送检时 ，用PBS洗涤2次，去除70％乙醇，加 100 PBS将 何种途径影响乳腺细胞增殖，目前尚不清楚。本实验通过观 细胞吹散，调整细胞数为6×10。／L，碘化丙啶染色，用流式细 察E 对人乳腺细胞株的增殖作用及 ERB的表达情况，探讨 胞仪测定 DNA含量的变化，分析E 干预后细胞周期的变化。 E 促进其增殖的机制，为进一步阐明E2在乳腺增生病的发 每组用3份样本实验 ，结果以百分比均值计算。 病机制提供实验依据。 ⑧ ERI3免疫组化染色 上两组细胞消化后清洗，离心涂片， 甲醛溶液固定。柠檬酸缓冲液抗原修复，采用免疫组化 PV 材 料 和 方 法 法。操作按说明书进行。结果评价：采用阳性细胞百分 比 法 ，记数不同高倍视野500个细胞，计算出细胞核内表达阳性 1 材料 细胞百分比。细胞核内表达为蓝色的为阴性细胞，出现深棕 人乳腺细胞株 HBL一100购于中国科学院细胞库。1713 一 色颗粒为阳性细胞。 E 由上海华联制药厂生产，四甲基偶氮唑蓝 (Mar)、胰蛋 白酶购 自Sigma公司，DMEM 购 自Gibco—BRL公 司。抗体 结 果 ERI3购 自NocMarkers公司，PV一6001试剂盒购 自北京中杉 金桥生物技术有限公司。 1 E2对HBL一100细胞增殖的影响 2 方法 E 于体外可显著刺激人乳腺细胞增殖 ，见图1。 2．1 细胞培养 HBL一100细胞培养于含 10％小牛血清的 DMEM培养基 (正常培