高糖与同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达及活性的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(9)：1839—1843 · l839 · [文章编号】 1000-4718(2010)09—1839一O5 高糖与同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞 MMP一9表达及活性的影响 陈黎红， 谢晓英， 杨 川， 严 励 ， 朱 平 ， 劳国娟， 郝少云 (中山大学附属第二医院内分泌科 ，广东 广州510120) [摘 要] 目的：观察不同浓度糖及同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP一9表达量及活性的影响。 方法：取 1d龄正常SD大鼠背部皮肤分离成纤维细胞，于含 10％胎牛血清的DMEM培养液中培养。2—4代生长 状态良好的细胞进行24h血清剥夺 (0．5％FBS)后 ，分为正常糖浓度组、高糖组、高糖+高同型半胱氨酸组分别培 养6h，之后用 RT—PCR、Westernblotting和明胶酶谱方法分别检测 MMP一9mRNA、蛋白表达量以及细胞外 MMP 一 9活性。结果 ：高糖 (22mmol／L)组MMP一9mRNA、蛋白表达量及其活性均增高，分别为正常糖浓度组的1．15 倍、1．59倍和 1．34倍，P0．05；高糖+高同型半胱氨酸(100~mol／L)增高组更加明显，依次为正常糖浓度组的 1．25倍、2．63倍和2．52倍 ，P0．05。结论：大鼠皮肤成纤维细胞在体外高糖环境下可高表达MMP一9；高同型半 胱氨酸在高糖环境下可使MMP一9表达及酶活性增高更为明显，表明高同型半胱氨酸血症也参与了对MMP一9的 调节，可进一步增加高糖环境下成纤维细胞表达MMP一9。 [关键词] 高半胱氨酸 ；基质金属蛋白酶一9；成纤维细胞 [中图分类号] R322．99 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．09．035 EffectsofhighglucoseandhomocysteineonexpressionofMM P-9inrat fibroblasts CHEN Li—hong，XIEXiao—ying，YANGChuan，YANLi，ZHUPing，LAOGuo—juan， HAO Shao——yun (DepanmemofEndocrinology，TheSecondAffiliatedHospitalofSunrat—senUniversity，Guangzhou510120，China． E—mail： @163．net) [ABSTRACT] AIM：Toobservetheeffectofdifferentconcentrationsofglucoseandhomocysteineontheexpres— sionofMMP一9infibroblasts，andtoinvestigatetherelationshipbetweenhomocysteineanddiabeticfoot．METHODS：Fi- broblastswereobtainedfrom thedermisof1一day—oldnormalSD ratandculturedinDMEM containing10％ FBS．After deprivationofseFum (using0．5％ FBS)for24h，thefibmblastsin2—4passageswereculturedfor6hunderthecondi— tionsofnormalglucose，highglucoseandhigh ucosewithhighconcentrationofhomocysteine，respectively．Theexpres— sionofMMP一9atmRNA andproteinlevelswas assessedbyRT—PCR andWestern blotting，andtheactivityofMMP一 9wasdeterminedbygelatinzymographyanalysis．RESULTS：Theexpression