汉族人免疫球蛋白G效应片段基因特征性分析.pdfVIP

· l214· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(6)：1214—1216 [文章编号] 1000—4718(2010)06—1214—03 · 短篇论著 · 汉族人免疫球蛋白G效应片段基因特征性分析 饶本强 ， 高晓燕 ， 王 磊 ， 黄美近 ， 汪建平 (中山大学附属第六医院 结直肠外科，儿科，广东 广州510655) [摘 要] 目的：分析汉族人免疫球蛋白G(IgG)效应片段(re)基因特征，比较中国汉族人IgGFc基因与西 方人 (基因库)的差异及其对编码氨基酸的影响。方法：取8名中国汉族人外周血淋巴细胞总RNA，合成 cDNA互 补第一链，进行RT—PCR反应，PCR产物进行基因测序和琼脂糖凝胶电泳。结果：与基因库 IgGFc基因比较，汉族 人IgGFc片段CH2区(CH2)第330个碱基、CH3区(CH3)第 321位碱基存在差异，分别为T—G和G—c。包含差 异基因在内的密码子编码的氨基酸CH2区均为精氨酸，但CH3区分别为甘氨酸和丙氨酸。结论：中国汉族人IgC,- Fc片段基因与基因库IgGFc片段基因比较分别在CH2区和CH3区存在 1个碱基差异，其密码子在CH2区编码的 氨基酸相同，但CH3区编码不同的氨基酸，可能影响IgG的免疫效应功能。 [关键词] 汉族；免疫球蛋白G；效应片段；基因多态性 [KEYWORDS] ChineseHan；ImmunoglobulinG；Effectfragment；Genepolymorphism [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．06．033 IgG可分为2个主要的结构单元：抗原结合片段和效应 min。吸去最上层血浆，收集血浆层和淋巴细胞分离液交界 片段 (fragmentcrytallizable，Fc片段)。Fc片段是免疫球蛋 白 面的单个核细胞，移入一新离心管，Hanks液5mL混匀后500 G(immunoglobulinG，IgG)重链中靠近 C端氨基酸序列非常 g，离心 10min，洗涤细胞2次。置于 175细胞培养瓶，5％ 稳定的区域，包括CH2区(secondconstantdomains)、CH3区 CO：、37℃恒温箱内培养培养4—6d。培养液为：含 10％胎 (thirdconstantdomains)2个区，共655个碱基构成。Fc片段 牛血清和 10％双抗 的 RPMI一164020mL，植物凝血素 无抗原结合活性 ，但能在抗原抗体结合后与效应分子结合产 (0．1％，Simga)10IxL，IL一21000U。 生一系列免疫反应 。如 IgG通过CH3可与巨噬细胞、NK 2．2 淋巴细胞总RNA抽提 采用RNA提取试剂盒抽提淋 细胞和嗜中性粒细胞表面的Fc受体 (Fcreceptors，FeaRs)结 巴细胞总RNA(PromegaCatalog#Z3100)，操作方法按说明书 合 ，促进这些细胞对靶细胞的吞噬和杀伤，该作用称为抗体 进行。 的调理作用和抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(cell—me— 2．3 IgGFc片段扩增和测序 PrtoscriptIIRT—PCRkit试剂 diatedcytotoxicity，ADCC)，IgG的CI-I2、IgM的CH3可以结合 盒(Biolabs，Catalog#E6400s)逆转录合成互补DNA第一链，反 补体Clq，通过经典途径激活补体等 』。因此，F’c片段在机 应条件：1 g总RNA、50p~mol／LdT23VN2IxL和dNTPmix 体免疫系统中具有重要作用。我们在利用IgG效应片段构建