磷酸化细胞周期素依赖性激酶在局灶性脑缺血大鼠神经细胞中的表达.pdfVIP

· 588· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(3)：588—590、594 [文章编号] 1000—4718(2009)03—0588—04 磷酸化细胞周期素依赖性激酶在局灶性脑缺血 大鼠神经细胞中的表达 解翠红 ，‘王 伟 ， 喻志源 ， 杜晓萍 (华中科技大学同济医学院附属同济医院 急诊内科，神经内科，湖北武汉430030) [摘 要] 目的：观察磷酸化细胞周期素依赖激酶在大鼠局灶性脑缺血后神经元和星形胶质细胞的表达。 方法：采用大脑中动脉阻塞 (MCAO)方法制作大鼠局灶性脑缺血模型，应用免疫荧光技术检测缺血后 1d、3d、7d、 14d大鼠缺血侧病灶周围神经元和星形胶质细胞中磷酸化周期素依赖激酶2(CDK2)、磷酸化细胞分裂周期激酶2 (CDC2)的表达。结果：在神经元中，与正常对照组相比，缺血后 1d、3d组磷酸化 CDK2的表达量明显增加(P 0．05)，磷酸化CDC2在正常组及缺血组均无明显表达；在星形胶质细胞中，缺血后 1d、3d、7d均出现明显的磷酸 化CDK2、CDC2的表达，与对照组相比有显著差异(P0．05)。结论：大鼠局灶性脑缺血后早期部分神经元再次进 入细胞周期，细胞周期调控机制可能参与了大鼠局灶性脑缺血后神经元的凋亡及星形胶质细胞的分裂增殖。 [关键词] 脑缺血；细胞周期蛋白质依赖激酶类 ；神经元；星形细胞 [KEYWORDS] Brainischemia；Cyclic—dependentkinases；Neurons；Astrocytes [中图分类号] R363 [文献标识码] A 近年来迟发性神经元死亡与脑缺血、脑退行性变的关系 按改良Nagasawa方法建立大鼠局灶性脑缺血模型。假 受到广泛关注。而细胞凋亡是迟发性神经元死亡的主要方 手术组只分离、暴露血管，不予缺血。 式，研究发现在变性疾病、缺血、兴奋毒性引起的脑损伤中， 3 试剂 神经元的凋亡明显增加…。脑损伤中神经元的凋亡及其发 单克隆兔抗大鼠phospho—CDK2(Thrl60)抗体、单克隆 生机制现已成为广泛研究的重点。细胞周期相关蛋白是细 兔抗大鼠phospho—CDC2(Thrl61)抗体均购 自CellSignaling； 胞周期调控的关键成分，有研究认为细胞周期相关蛋白的功 单克隆小鼠抗大鼠NeuN抗体、单克隆小鼠抗大鼠GFAP抗 能不仅局限于细胞周期的调控，而且参与了神经元的凋亡过 体、鼠抗TRITC及兔抗 FITC均系SantCruz产品。异戊烷购 程 J。而星形胶质细胞在脑缺血后的反应也 日益引起人们 自上海化学试剂公司，为进 口分装产品。OCT为Sakou产品， 其余均为国产分析纯试剂。 的重视，大量研究表明脑损伤后星形胶质细胞的反应与神经 4 脑组织切片 元的存活及功能修复有着密切联系 。为此，我们设计此实 各组Wistar大鼠，勿麻醉，按分组规定时限断头取脑，用 验，通过观察局灶性脑缺血后神经元和星形胶质细胞中DNA OCT包埋 ，用锡铂纸包裹投于 一70℃异戊烷中骤冻 1min 合成前期至 DNA合成期(gapl—synthesisohase，G。一S)和 后，已冻好的鼠脑，装盒备用。冰冻额状切片，片厚 lO m，取 DNA合成后期至分裂期 (gap2一mitosisphase，G2一M)相关 缺血最大处，每隔5张取 1张切片。 的磷酸化细胞周期素依赖激酶2(cyclin—dependentkinase2， 5 免疫组化染色 CDK2)和磷酸化细胞分