慢病毒载体介导2次转基因对人胚胎干细胞特性的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPath ! ：垄i 2；!12二三Q · 2l97 · [文章编号] 1000—4718(2009)11—2197—07 慢病毒载体介导2次转基因对人胚胎 干细胞特性的影响 蔡柳洪 ， 周灿权 ， 张 滨 ， 陶 欣 ， 林 慧 (中山大学 附属第三医院不育与性医学科，广东 广州510630；附属第一医院生殖中心，广东 广州510890) [摘 要] 目的：研究2次转基因对人胚胎干细胞 (hESCs)多能分化特点和保持 自我更新能力的影响。方 法：构建携带非转录因子外源基因细胞毒性 T细胞相关分子4免疫球蛋白 (CTLA41g)、吲哚胺2，3双氧化酶 (IDO)和荧光素酶的慢病毒载体，在hESCs先转导外源基因CTLA4Ig或 IDO，完成筛选后转导外源基因荧光素酶。 检测hESCs中外源基因的表达和功能，免疫组化和RT—PCR以及流式细胞仪方法检测hESCs细胞表面标记物、类 胚体(EB)形成和体内畸胎瘤形成能力。结果：转导的外源基因均能表达并表现相应的功能。2次转导慢病毒载体 后hESCs细胞表面标记物肿瘤排斥抗原 (Tra～1—60)和 Octomer转录因子一4(OCT一4)染色仍为阳性，能形成 EB，RT—PCR检测到甲胎蛋 白(AFP)、配对盒基因6(Pax6)和MSI1的表达，异种移植后荧光信号逐渐增强。结论： 利用慢病毒2次转导非转录因子外源基因不影响hESCs的未分化状态和多能分化能力，这对hESCs的转基因研究 具有借鉴价值。 [关键词] 人胚胎干细胞；慢病毒载体；基因转染 [中图分类号] R392．4 [文献标识码] A Effectofdoublegenetransductionmediatedbylentiviralvectorsonchar- acteristicsofhumanembryonicstem cells CAILiu—hong ，ZHOUCan—quan ，ZHANG Bin ，TAOXin ，LIN Hui (DepartmentofInfertilityandSexualMedicine，TheThirdAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou 510630，China；ReproductiveMedicalCenter，The FirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510890， China．E—mail：cailiuhong@hotmail．corn) [ABSTRACT] AIM：Tostudytheeffectofdoublegenetransductionmediatedbylentiviralvectorsonthecharac— teristicsofhumanembryonicstem cells(hESCs)．METHODS：Usingthebackbonefrom inducibaldualandexcisable transgenevector(iDuetl01)，lentiviralvectorsoverexpressingcytotoxicTlymphocyte—associatedmolecule一4immuno— globulin(il)uetl01一CTLA4Ig)，indoleamine2，3dioxygenase(iDuetl01一IDO)，andubiquitin—Cpromoter—lucifer· ase—ires—puromycin(ULIP)wereconstructedandpackagedaccordingtothestandardrecombinanttechniques．Human embryonicstem cells(hESCs)werefirsttransducedwithiDuetl01，iDuetl01一CTLA4IgoriDuetl01一IDO，then，afte