限制性酶切片段差异显示技术搜寻和克隆肝癌相关基因.pdfVIP

维普资讯 · 2218· ChineseJournalofPathophysiology 2006，22(11)：2218—2222 [文章编号] 1000—4718(2006)l1—2218—05 限制性酶切片段差异显示技术搜寻和 克隆肝癌相关基因出 赵苗青 ， 李劲松 ， 胡成进 ， 张喜善 ， 克丙申 ， 陈英剑 (山东大学齐鲁医院病理科，山东 济南 250012；泰山医学院病理教研室，山东 泰安271000； 济南军区总医院实验诊断科 ，山东 济南 250031；泰山医学院附属医院骨科，山东 泰安271000) [摘 要] 目的：筛选新的肝癌相关基因并对其作用进行研究 ，探讨肝癌的发生机制，从而对肝癌的早期诊断 和治疗提供新的思路。方法：应用限制性酶切片段差异显示技术对比研究手术切除的新鲜的原发性肝细胞癌组织 及其周围相对正常的肝组织，通过放射 自显影显示结果并筛选差异条带。对差异表达基因序列进行克隆、测序和 GenBank同源性比对，进一步分析差异表达的基因片段。结果：筛选出 18条表达有差异的条带，其中肝癌组织表达 上调的基因有 16条，肝癌组织低表达或缺失，正常组织高表达的基因有2条。二次PCR扩增出3条差异条带 ，进行 克隆、鉴定和测序，并进行同源性比较。其中1条基因与已知基因无明显同源性．可能为新的基因；1条基因序列与编 码人类核糖体蛋白基因的eDNA同源性较高(86％)；另有 1条基因序列与编码P选择蛋白的基因高度同源(98％)。结 论：共克隆鉴定了3条肝癌相关基因，并初步探讨其功能，为进一步探讨肝癌的发生机理提供了理论依据。 [关键词] 肝肿瘤 ；放射 自显影术 ；基因复制；限制性酶切片段差异显示技术 [中图分类号] R735．7 [文献标识码] A Searchingand cloning ofdifferentially expressed genesin livertumor by restrictionfragmentdifferentialdisplayPCR ZHAOMiao—qing ，LIJin—song，HUCheng—jin，ZHANGXi—shan，KEBing— shen ，CHENYing—iian (DepartmentofPathology，MedicalSchoolofShandongUniversity，Jinan250012，China．E—mail：jinsong@sdu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM ：Theaimofthisstudywastoisolateandclonethelivertumor—associatedgenesbyrestriction fragmentdifferentialdisplayPCR (RFDD—PCR)methodsthatdevelopedrecently．METHODS：TotalRNAWas extracted fromprimarycarcinomaoftheliverandadjacentnoncanceroustissueseparately．Themethod ofRFDD—PCRWas usedto searchforthedifferentiallyexpressedgenes．EachgenesegmentWas sequencedaftercloning．Th esequencehomogeneity were naalyzedna dcomparedwithBLASTthroughInternet．Th edatawerethentransportedintotheTranslatedBAL ST Sera— chestoacquire hterelatedinformationsuchas thecorrespondingproteinfunction．RE