P21癌基因在人完全性葡萄胎与正常胎盘组织中的表达.pdfVIP

P 癌基因在人完全性葡萄胎和正常胎盘组织中的表达 21 张晓丽 高英茂 王富武 武玉玲 邴鲁军 李少玲 山东大学医学院组胚教研室 （250012） [摘要] 目的 研究P21癌基因与葡萄胎发生的关系。方法 取完全性葡萄胎和正常早孕流产标本 各30例,用SABC免疫组织化学染色方法, 检测P21癌基因在两种组织中的表达，并采用图像分析技 术，对正常早孕绒毛组和葡萄胎组P21癌基因的表达情况进行对比分析。结果 与正常绒毛相比， P 癌基因在葡萄胎组织中的表达量没有显著性差异，表达部位有明显不同。结论 P 癌基因与 21 21 葡萄胎发生密切相关。 [关键词] P21癌基因 葡萄胎组织 胎盘绒毛 免疫组织化学染色 葡萄胎是在胚胎发生过程中，由于胎盘绒毛滋养层细胞过度增殖而形成的一种病理变化， 其生物学行为与肿瘤非常相似,如具有侵蚀性生长的特性等。而肿瘤细胞的原癌基因表达有两个 普遍和突出的特点，一是某些癌基因高水平或过度表达，二是原癌基因的表达程序发生紊乱， 不再具有细胞周期特异性。因此研究某些癌基因在葡萄胎发生过程中的表达对阐明其发生机制 有非常重要的意义。本研究采用敏感性高、特异性强且操作快速简便的免疫组织化学SABC （Strept Abidin-Biotin Complex ）方法，检测早期流产的正常胎盘绒毛和完全性葡萄胎组织中P21 的表达情况，以探讨P21 的表达状况与葡萄胎发生的相关性。 材料和方法 1． 1材料来源 30例完全性葡萄胎均为临床首次清宫组织，孕龄为6-16周不等；同时收集6-12 周早孕人工流产绒毛标本10例作为对照。葡萄胎组织标本来源于山东医科大学附属医院、山东 省立医院和一些县、市级医院的妇产科病人，经病理诊断为完全性葡萄胎。正常胎盘绒毛标本 取自山东医科大学附属医院计划生育门诊刮宫流产病例。 1．2 试剂 鼠抗人P21单克隆抗体购自北京中山金桥生物技术有限公司，SABC免疫组化检测试 剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。 1．3 方法 所有标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋、切片厚7μm ，经二甲苯脱蜡，梯度酒 精脱水，3％H O 封闭过氧化物酶，恒温箱96-100℃20分钟进行抗原修复。滴加0．0l M PH 7．4 2 2 的PBS稀释的P21一抗 （1：250）4℃孵育24～36小时，阴性对照组以正常血清代替一抗，其余步 骤完全相同。滴加0．0l M PH 7．4的PBS稀释的二抗37℃孵育30分钟，最后室温下DAB显色， 镜下控制显色时间，至阴性对照将着色时为止。期间各步均以0．0l M PH 7．4的PBS洗涤3次， 每次5分钟。梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，苏木素复染。 1.4 显色结果判定 P21蛋白免疫组化阳性结果表现为滋养细胞胞浆或胞核呈棕黄色，阴性对照 不显色。用彩色图像分析系统（未复染切片）对标本中阳性细胞进行定量分析：每例标本选10 1 个高倍视野，共测10个细胞的阳性信号灰度值。将图像分析所得数据用 （均数±标准差）表示。 1.5 统计学处理 对所得数据用spss统计软件进行方差分析,P值显著性取P0.05 2 结果 正常早孕胎盘绒毛及葡萄胎均有P21基因的阳性表达，呈棕黄色颗粒状。 图1 正常绒毛P21免疫组化染色结果,示 图2 P21葡萄胎绒毛组织免疫组化染色结果,示细胞 细胞滋养层细胞和部分间质细胞细 滋养层胞核、胞浆呈阳性表达;部分合体滋养 胞浆呈阳性着色,合体滋养层细胞 层细胞核及间质细胞胞浆也呈阳性表达, 浆呈阴性或弱阳性表达，400× 400× Fi