斑马鱼hand2基因的克隆_抗体制备和分析.pdfVIP

2010年 3月 湖南师范大学自然科学学报 Vol. 33　No. 1 　　　　　　　　 　 　　　　　　　　 　 第 33卷 第 1期 Jou rnal of N atu ral Science of Hunan Norm al Un iversity M ar. , 20 10 　　　　　　　　　 斑马鱼 h an d2基因的克隆、抗体制备及分析 朱 　婷 ,黄 　文 ,王跃群 ,李永青 ,袁婺洲 ,莫小阳 ,万永奇 ,吴秀山 ,邓 　云 (湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心 , 中国 长沙 　4 10081) 摘 　要 　为利用斑马鱼动物模型进一步研究 bHLH 转录因子家庭重要成员 hand2 基因在心脏发育中的功能 , 采用生物信息学结合 R TPCR 的方法获得了斑马鱼 hand2基因. 将所得片段插入原核表达载体 p GEX4 T1中 ,并通 过 IPTG诱导表达出 GSTH and2 融合蛋白, 经 GST亲和层析法纯化后 ,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体 ,利用 we stern b lotting和免疫组化的方法对抗体进行分析. 分析表明:斑马鱼 hand2 基因成熟肽编码区含有 627 bp ,编码 208个氨基酸 ,与人 H and2 蛋白的同源性达到 83% ; IPTG诱导表达后 ,表达的融合蛋白占菌体总蛋白的 7 1% ,经 GST纯化获得 SD SPA GE 电泳下单一条带. 融合蛋白相对分子质量约为 49 000. 分析表明 ,制备的抗体具有很好的 特异性. 关键词 　hand2;斑马鱼 ;原核表达 ;多克隆抗体 中图分类号 　Q812　　　　文献标识码 　A 　　　　文章编号 (20 10) 010 10806 C lo n in g a n d P o lyc lo n a l A n tibo dy P rep a ra tio n o f h a n d2 G en e in Zeb ra fish ZHU T ing, HUAN G W en, WAN G Yuequn, L I Yong q ing, YUAN W u zhou, M O X iaoy ang, WAN Yong qi, WU X iu shan, D EN G Yun ( The Cen ter for H eart D evelopm ent, Key L ab of MOE for D evelopm en t B iology and Protein Chem istry, Hunan Norm al U n iversity, Changsha 4 10081, Ch ina) A b stract　The hand2 gene in zeb rafish is cloned by b io inform atic s comb ined w ith R TPCR techn ique, then hand2 fragm en t is in serted in to p GEX