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高效液相色谱法分离纯化人胎盘泌乳素酶切片段*
杨 煜 杨 波 麦荫乔
（白求思医科大学 长春 130021）
1 前言 过SephadexG-75和G-100柱，洗脱液为0.02mol/L
NH4HCO3pH8.0。再经圆盘电泳纯化，获得纯品。
人胎盘泌乳素Humanplacentallactogen,
以上每步纯化的收集物均用15I-HPL药盒测定活
HPL）是由胎盘绒毛滋养层的合体细胞分泌的一种
性，将有活性的收集峰进行下步纯化。电泳带从电泳
单链多肽类激素。它主要有催乳作用[]及促生长作
胶上切下后，小心用玻璃棒磨碎，加少量电极缓冲液
用[2]。它与人垂体生长激素(Humangrowthhor-
4℃静置过夜，次 日过滤，滤液测活性，将有活性部分
mone,HGH）的氨基酸序列有85％是一致的，多肽
透析冻干即为纯品。
链长度及二硫键的位置也完全一致。它们关键的不
同在于HPL仅有较弱的促生长活性[3]，若用酶处 2.2.2 HPL的酶切 将HPL与结晶胃蛋白酶放
理，则HPL活性下降，HGH样活性不变。由此推测 入pH3.8-4.0的醋酸缓冲液中，在4℃条件下放置
12小时，将溶液调至pH为7.0，终止反应，获得酶切
HPL的促生长及泌乳活性可能存在于碎片之中。文
片段。
献报道[5-7]用酶切HPL，目的在于测定酶切片段的
2.2.3 HPL酶切片段的纯化 将HPL酶切片段
氨基酸组成，进而得出HPL的整个氨基酸顺序。我
过SephadexG-50柱，洗脱液为0.01mol/L磷酸盐缓
们的实验目的在于酶切后测HPL的促生长 或（促泌
冲液，收集洗脱峰做15I-HPL及15I-HGH放免活性
乳）活性在哪个片段较高，从而为今后的基因工程研
测定，再将活性高的组分做HPLC分离，收集色谱
究打下基础。我们参考了Li等人[4]报告的方法，从
峰后同样做放免活性测定。
胎盘中提取出HPL，再经结晶胃蛋白酶切割高效液
2.2.4 HPLC分离条件 HPL的纯度分析所用色
相色谱 HPLC）纯化，分离得有促生长活性的HPL
谱柱为Bil-GelTSKDEAE-5-PW (7.5mmi.d.×
片段。
75mm)；流动相A：0.02mol/L磷酸盐缓冲液，pH
2 实验部分 6.8，流动相B：0.5mol/LNaCl（内含0.02mol/L磷
2.1试剂与样品 酸盐缓冲液）pH6.8，线性梯度洗脱0→60%B，
2.1.1 试剂 SephadexG-50,G-75,G-100Phar- 30min检测波长280nm，灵敏度0.01AUFS；流速
macia公司），12I-HPL及15I-HGH放射免疫检测药 1mL/min；柱压5.6 1
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