高效液相色谱法测定废毕赤酵母中氨基酸成分.pdfVIP

发酵科技通讯 第39卷 高效液相色谱法测定废毕赤酵母中氨基酸成分 曾 栋1’2戴永道1 广东珠海519040 (1珠海联邦制药股份有限公司 2．华南理工大学广东广州510641) 摘要：巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统，目前已有 几百种蛋白在该系统中得到了表达。随着部分蛋白逐渐被应用到工业生产中，其生产中产生的废毕赤酵 母的处理将越来越受到人们的重视。本文对实验研究产生的废毕赤酵母中的氨基酸成分进行了分析，为 废毕赤酵母的综合处理提供了一条重要思路。 关键词：毕赤酵母高效液相色谱氨基酸成分分析 随着分子生物学技术的发展，利用微生物表 本公司实验研究产生的废毕赤酵母 达系统生产外源基因的产物成为可能。巴斯德毕 1．1．2仪器与试剂 赤酵母(Piehiapastoris)表达系统是上世纪80年Waters高效液相色谱仪、恒温鼓风干燥箱、 代初期发展起来的一种新型的外源蛋白表达系 统【1】，它既具有原核表达系统操作简易、易于培 养、生长速度快、表达量高、成本低等优点，还具 酸缓冲液l、衍生剂粉2A、稀释液2B)、盐酸(分析 有原核生物表达系统所不具有的对外源蛋白的 纯)、乙腈(HPLC级)、超纯水 翻译后修饰等特点，如糖基化、蛋白磷酸化等。同 1．2实验方法 1．2．1色谱条件 时它还避免了酿酒酵母(Saecharomyceseermisiae) 分泌效率差、表达菌株不够稳定、表达质粒易丢 失等缺陷12】。经过二十几年的发展，巴斯德毕赤酵 150mm，4¨m)(柱体积：1．8m1) Waters 母表达系统在国内外已经引起了高度重视，已基 1．2．1．2流动相A：50lml AccQ—Tag流动 本成为可以生产多种融合蛋白的高效表达系统， 相A浓液加超纯水稀释至500ml，0．45txm滤膜过 到2005年止，已经有500多种蛋白在该系统中滤；流动相B：乙腈；流动相C：超纯水 进行了表达f3J1其潜力之大，将对今后基因工程产 1．2．1．3流速：1．0ml／min；柱温：37℃；紫外检测波 品的开发和生物技术的发展产生重要作用。随着 长：248nm；进样量：5弘l；记录时间：45min 毕赤酵母被广泛应用到工业生产中，如何处理毕 1．2．2供试品制备 赤酵母工业生产后产生的废酵母将成为摆在人 将废酵母菌渣置于恒温干燥箱中，120℃ 们面前的现实问题，目前，对啤酒废酵母的处理 干燥至恒重，用乳钵研碎后，取粉末5rag，精 研究较多，而对废毕赤酵母的处理研究则鲜有报 密称定，加入5ml，6mol／LHCl溶解，于110℃ 道，本文对实验研究产生的废毕赤酵母中氨基酸 恒温放置18h，蒸干，加水溶解并定容至 组成进行了研究。 10llll。 取氨基酸测定试剂盒，按要求处理好样品和 1材料与方法 氨基酸标样。 l。1实验材料 1．2．3氨基酸测定 1．1．1样品来源 高效液相色谱系统用乙腈／水(60：40)冲洗 褫兰斓 第磊嵩荤；膂 发酵科技通讯 5rain，用100％AccQ-Tag流动相A平衡柱10min