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活性蛋白整体方案 热启动酶的原理与应用 提高PCR扩增特异性的方法有很多，最简单的方法就是采用热启动酶扩增，多数人不知道Taq酶的作用机制，本文 介绍了热启动酶的作用原理和主要应用，帮助我们更好的选择用酶。 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外合成双链DNA 的一种方法，其原理类似于天然DNA 的复制过程，其特异性主要依赖于与其目的片段两段互补的特异引物。典型的PCR反应有三个步骤：变性，退火， 延伸，经过多次循环反应，获得目的片段。 热启动Taq酶的原理 在PCR的发展历史中，热稳定taq酶的探索发现是制约PCR发展的重要因素，最初被运用到PCR 中的酶是大肠 杆菌DNA聚合酶 I的Klenow片段，Klenow酶每次循环都需重新加入，过程繁琐。此后，科学家成功的从水生嗜热 杆菌中提取出耐热的DNA聚合酶，该酶在90℃下反应2小时仍具有70%的活性，这就避免每次循环重新加酶的过程， 提高了扩增效率，因此被广泛运用到PCR扩增中。 温度对酶活性的影响表现为双重作用，高温失活，低温抑制。普通的Taq DNA聚合酶的最适温度是72℃，此 时酶的活性最佳，小于此温度，酶有较弱活性。这样，在PCR扩增由低温上升至高温的过程中 （也就是温度达到变 性温度时）酶发挥较弱的活性，体系极易错配或形成引物二聚体，尤其是当设计的引物3’端是G或C，错配的链 很难重新解开。因此要提高PCR扩增的特异性和降低反应错配率，可以人为的控制酶的活性，在72℃之前让酶不 发挥活性，这样就避免了在升温过程中 （或配置反应体系）发生链的错配，从而保证扩增的特异性。Relia热启动 酶就是采用化学修饰的方法封闭酶的活性中心：低温下化学小分子和酶活性中心结合，酶无活性，温度升高至95℃， 两者脱离，酶活性中心暴露，开始指导体系扩增 （如图一），极大的提高扩增的特异性和灵敏度。与抗体封闭的酶 相比，化学修饰的酶活性维持更加稳定（抗体封闭是一种动态平衡）且无任何外源DNA污染。 图一：热启动原理 热启动Taq酶的应用 PCR能够快速特异的扩增任何已知的DNA片段，因此被广泛的应用于分子生物学的各个领域。Relia热启动酶因具 有5’-3’核酸外切酶活性，可用于荧光定量PCR反应。采用热启动法扩增是提高PCR特异性的常用方法，热启动 酶是很好的选择。除此之外，因其具有的高特异性高灵敏度被广泛应用到各个方面：构建cDNA文库，产生大量DNA 网址： 活性蛋白整体方案 测序，突变体分的析构建，基因分离，遗传病诊断，法医鉴定等。 网址：