溶胶-凝胶法固定化α-淀粉酶和其固定床运行研究.pdfVIP

维普资讯 圈 2007．VO．24No．1化Che学m~V与y耋Bio劬enginZeer程 溶胶一凝胶法固定化 一淀粉酶及其固定床运行研究 司志斌 。高春光 ，张铁明．赵永祥 (山西大学化学化工学院，山西 太原 030006) 摘 要 ：以正硅酸 乙酯为硅源、醋酸为水解催化剂t采用溶胶一凝胶法t室温下制得包埋 淀粉酶的二氧化硅凝胶颗 粒。模拟固定床的条件，曩j定了固定化 淀粉酶的重复使用回收活性及米氏常数，结果表明其重复使用4O次后仍保留 3O 以上 的初始活性 。 关键词：溶liE-tltllg~固定化酶} 淀粉酶}米氏常数 中圈分类号：TQ925．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672—5425(2oo7)O1一oo36一O2 溶胶一凝胶法固定化酶的方法是近年来发展起来 操作流程如图 1所示。 的一种新的固定化生物酶及微生物细胞等生物活性组 分的方法 h 。与现在常用的方法[3相 比，溶胶一凝胶 回 塑 圃 鲴 法具有反应条件温和、操作简便易行、适用范围广、通 墓II冰蒸馏蘑酸水_—IIjJ一_．++ 用性强、固定化过程中可方便地加入各种修饰剂等特 点，在分析化学领域得到了广泛的重视与应用 】，但其 巨圆 在酶化工中的应用还有待更深入的研究[1]。高春光 圈 l 溶胶一凝胶法固定化 淀粉毒操作流程 等[5近年来开展了溶胶一凝胶法固定化生物酶的应 FI l 啊IeaeFgelprocedurestopreltare 用研究，探索其在生物化工领域大规模应用的潜力。 eacalpA lateda-tumylase 作者采用溶胶一凝胶法，制备了适合于固定床使 用的包埋 口-淀粉酶的二氧化硅凝胶球形颗粒，模拟 固 1．3 固定化酶的活性表征及米氏常数测定 定床的操作模式测定了固定化酶的重复使用 回收活性 1．3．1 重复使用回收活性的测定 及米氏常数 (K，，1)。 1 实验 1．1 主要试痢与仪器 正硅酸乙酯 、冰醋酸，分析纯 ，北京北化精细化学 品有限责任公司；口-淀粉酶 (由芽孢杆菌深层发酵提取 而成)，生物纯，北京双旋微生物培养基制品厂；水为高 纯蒸馏水 。 圈2 模拟 固定床装置圈 PHS-2C型精密 pH计 、7200型可见分光光度计． № 2 Th eassemblydiagramof锄la10gfixedbed 上海精密科学仪器有限公司。 1．2 溶胶一凝胶法固定化 淀粉酶[s,63 ． 将制备好的凝胶颗粒装填到如图2所示的自制玻 将一定量的正硅酸乙酯、蒸馏水及冰醋酸混合，持 璃柱中，以淀粉 (淀粉溶液需现用现配)作底物测定酶 续搅拌直至形成透明溶胶溶液，然后加人溶有 a一淀粉 的活性 们 采用间歇方式 ，每批次加入 固定体积与浓 酶的缓冲溶液，继续搅拌直至形成颗粒，放人冰箱在 度的淀粉溶液 ，反应一定时间后将溶液从下 口排 出，测 4℃下陈化7d，得到直径 2～4mm的包酶凝胶颗粒 。 定淀粉的消耗量确定活性 ，如此反复测定 固定化酶的 基金项 目：山西省科委攻