人U6基因POIⅢ启动子表达反义VEGFcDNA抑制SMMC_7721肝癌细.pdfVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 第 16 卷第 3 期 CN 　113870Q Ch in. J. B iochem. M o l. B io l. 2000, V o l. 16, N o. 3, 388～ 393 2000 年　6 月 人 6 基因 启动子表达反义 抑制 U PO I VEGF cD NA SMM C- 7721 肝癌细胞 VEGF 表达的观察 汤宇澄　钱关祥　陈诗书 (人类基因治疗研究中心, 上海第二医科大学, 上海　200025) 摘要　由RNA 聚合酶启动子在细胞内转录高浓度反义RNA 是抑制靶蛋白的一种有效手段, 有报 道 PO I 启动子转录小分子RNA 存在效率不高, 带有较多的非特异性序列等缺点, 为了克服这些 问题, 表达反义 的人 6 基因表达盒对人肝癌细胞株 7721 表达的抑制 V EGF RNA U SMM C V EGF 作用进行了研究 首先 扩增 200 以正、反向插入人 6 通过测序证 PCR bp V EGF cDNA U snRNA 实反向插入的正确性 采用细胞原位杂交, RNA 酶保护分析,N o rthern 印迹来证实反义RNA 表达 的情况, 利用 方法研究了其对人肝癌细胞株 7721 表达的抑制效果 细胞 R T PCR SMM C V EGF 原位杂交结果显示U 6 启动子转录产物主要分布于细胞核内, 细胞浆内亦有表达, RNA 酶保护分 析显示U 6 基因 PO I 启动子能高表达所需大小反义RNA ,N o rthern 印迹结果显示脂质体 lipo fectam ine 介导含U 6 基因 PO I 启动子的质粒转染人肝癌细胞株 SMM C7721 后 12 h 即有表达 且可持续表达 6 证实 6 基因 启动子转录的反义 能有效抑制 d R T PCR U PO I V EGF RNA SMM C7721 细胞V EGF 的m RNA 表达 已有的研究结果揭示PO I 启动子是反义基因治疗中 一种好的选择 关键词　反义 , 6 启动子, 人肝癌细胞株 V EGF U PO I 中图分类