禽网状内皮组织增殖病病毒LTR序列启动子功能.pdfVIP

维普资讯 第 19卷 3期 中 国 病 毒 学 19(3)：255—258 2004年6月 VIRoLOGlCA SlNICA June 2004 禽网状内皮组织增殖病病毒LTR序列的启动子功能 赵文明 ，丁家波 2，姜世金 2，崔治中 2 (1．扬州大学畜牧兽医学院，江苏扬州 225009；2．山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271018) ThePromotingFunctionofLongTerminalRepeatfrom ReticuendotheliosisVirus ZHAOWen—ming ，DING Jia—bo。JIANGShi-jin。，CUIZhi—Zhong。 ， fJ．CollegeofAnimalHusbandyandVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity,Yangzhou22500,China；2．Collegeof AnimalScienceand Technology,ShandongAgriculturalUniversiyt,Taian271018,ChinaJ Abstract：111elongterminalrepeat(LTR)ofReticuendotheliosisvirus(REV)wasamplifiedbyPCR techniqueandclonedintopUC18vectoratthesitesofEco nadSacI．na dhteBGH polyadenylation signalsequencewasclonedathtesitesofSphInadHindIIIasaterminor．1]hepositiveclonewas nma edpUC—LTR．whichwasusedasabasicexpressingvectortovalidatehteactivityofLTR．Green fluorescentprotein (GFP)nad REV envelope glycoprotein 90 (gp90)genewascloned athte downstream ofLTR inhte pUC—LTR vectorrespectivelyasarepo rter．Thesetwo recombinants pUC—IrR—GFPnadpUC—LTR—gp90werehtentrnasfectedintoChickenEmbryoFibroblast(CEF)cells． 48hafterthertna sfcetion．wecoulddetecthteexpressionofGFPna dgp90．ThjsstudyshowshteLTR sequencecouldbeusedasapromotertoconstructexpressingvectors． KeyWords：Reticuendotheliosisvirus(REV)；Longterminalrepeats(LTR)；Promoter：Expressing vector 摘要：通过PCR方法，将禽网状内皮组织增殖病病毒 (REV)的长末端重复序列 (LTR)扩增并克隆进pUC一18质 粒多克隆位点 (MCS)的EcoRI~ISacI之间，并 以BGH基因的多聚腺苷酸序列作为终止子克隆到SphI~HindHI 之间，构建成重组质粒pUC—LTR。将GFP基因和REV囊膜糖蛋~lgp90基因分别克隆~JlpUC—LTR载体中，获得质粒 pUC—LTR—GFP和质粒pUC—LTR—gp90。重组质粒经转染48