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6 生 物 技 术 20 10年 20 ( 1)
- trapp er法 [ 6 ] 。不过用这些方法合成全长 cDNA 需要较多的 参考文献 :
mRNA ,步骤多 ,操作繁琐 [ 7 ] 。 [ 1 ]刘晓棠 ,赵伯涛 ,张玖 ,等. 栀子的综合开发与利用 [ J ]. 中国野生
SMAR T ( Sw itch ingM echan ism A t 5 ′end of RNA Tran scrip t) 植物资源 , 2008, 27 ( 1) : 19 - 23.
技术是基于 Powerscrip t反转录酶的末端转移酶活性而开发的 [ 2 ] Zhu YY, M ach leder EM , Chench ik A , et al. R everse tran scrip tase
一项技术 ,当反转录进行到 mRNA 的 5 ′端时 , 能够在合成的 temp late sw itch ing: a SMAR T app roach for fu ll - length cDNA library con
struction [ J ]. B iotechn iques, 200 1, 30 (4) : 892 - 897.
( )
cDNA 3 端′添加几个脱氧胞嘧啶核苷酸 dC ,从而与加入反应
[ 3 ] Edery I, Chu LL , Sonenberg N , et al. An efficient strategy to isolate
体系的 SMAR TⅣO ligo 引物中的几个连续的脱氧鸟嘌吟核苷 fu ll - length cDNA s based on an mRNA cap retention p rocedu re ( CA Ptu re)
( )
酸 dG 配对 ,使得逆转录酶转换模板 , 以 SMAR TⅣO ligo作为 [ J ]. M ol. Cell B iol. , 1995, 15 ( 6) : 3363 - 3371.
延伸模板继续延伸 cDNA 单链到引物的末端 ,结果第一链 cD [ 4 ] Suzuk i Y, Sugano S. Con struction of a fu ll - length enriched and a 5 ′
NA 的 5 端′就含有 SMAR TⅣO ligo 的序列 ,从而可以合成 5 端′ - end enriched cDNA library u sing the oligo - capp ing m ethod [ J ]. M eth
TM TM ods M ol. B iol. , 2003 , 22 1 ( 1) : 73 - 91.
完整 的双链 cDNA 。利 用 Creator SMAR T cDNA L ib rary
Con struction Kit可在总 RNA 的含量低至 50ng时仍可进行 cD [ 5 ] Efimov V
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