英茂盛业-EF1a启动子双标非融合慢病毒表达载体.pdfVIP

    pLV-EF1a-EGFP(2A)Puro                    Cat. No. VL3404  慢病毒基因过表达载体      MCS                             MluI               XhoI             SmaI  XbaI                  EcoRI              NotI              BstBI                 BamHI  TTTCTAGAAA TGTACAAGGA ATTCACGCGT GCGGCCGCCT CGAGTTCGAA CCCGGGCCCG GATCCCTAGA AAAGATCTTT ACATGTTCCT TAAGTGCGCA CGCCGGCGGA GCTCAAGCTT GGGCCCGGGC CTAGGGATCT 载体特性：  类型：慢病毒基因过表达载体  基因启动子：EF1a promoter  荧光标签：EGFP  真核细胞筛选抗性：Puromycin  原核抗性：Ampicillin  pLV‐EF1a‐EGFP(2A)Puro 载体是基于HIV1 的慢病毒基因过表达载体，采用EF1a 启动子启动目的基因 的表达。EF1a 启动子来源于EF1a 启动子来自人类靶向延长因子 1α （EF1A）基因，可在多数种类细胞 中稳定表达，尤其是某些CMV 启动子会发生沉默的细胞，如干细胞。通过将EGFP 基因放在不同的启 动子，该载体保留了EGFP 蛋白便利性，也避免了融合标签蛋白对目的基因功能产生影响。  PGK 启动子驱动表达EGFP 基因和Puromycin 抗性基因。可以使用Puromycin 筛选出稳定过表达目     Tel ：010                                                   Email: order@      的基因的细胞。EGFP 基因有助于判断病毒包装效率以及感染效率，同时也有助于稳定细胞的筛选。  pLV‐EF1a‐EGFP(2A)Puro 载体包含了生产慢病毒所必须的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表达效 率的原件。载体结构紧凑，在保证产生高滴度病毒的同时，载体对外源基因片段的容量达到3kb，多数 哺乳动物基因都可以在pLV‐EF1a‐EGFP(2A)Puro 中成功表达。  用法说明  pLV‐EF1a‐EGFP(2A)Puro 载体用于在包括原代培养细胞在内的各种哺乳动物细胞中稳定表达外源基因和 Puromycin 抗性基因。pLV‐EF1a‐EGFP(2A)Puro 载体与包装载体共转染HEK293T 细胞后（包装体系货号KLV3501 和KLV3502），产生高滴度复制缺陷的慢病毒颗粒，可以直接用于感染细胞或者纯化浓缩后感染细胞。  测序引物：  正向引物EF‐F：ATTCTCCTTGGAATTTGCCCT  反向引物PGK‐R：GGAGGAGTAGAAGGTGGCG  主要载体元件位置  • 5 LTR: 1–635  •  Psi (packaging signal): 685–822  •  RRE: 1303–1536  • cPPT/CTS: 2028–2151  •  EF1a prom