鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒禽白血病病毒A、C、D亚群基因芯片检测方法建立.pdfVIP

第四届京津冀一体化畜牧兽医科技创新研讨会 ●医学部分·基础性研究 暨“瑞普杯”新思想、新方法、新观点论坛 I论文集 鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与 禽白血病病毒A、C、D亚群基因芯片 检测方法的建立术 苏霞．朱瑞豪，陈小玲，杨丽聪。周宏专，徐福州．杨兵一 (北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室．北京100097) 摘要：根据NCB|收录的鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒A、C、D亚群 参考毒株的序列，设计合成特异性扩增引物及探针，将下游引物进行Cy3荧光标记，制备基因芯片； 分别提取几种病毒的基因组DNA，进行PCR扩增后与探针进行杂交。荧光检测仪扫描并分析结果。 结果表明：制备的芯片能够同时检测鸡传染性贫血病毒、禽网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒A、 C、D亚群，具有较高的特异性和灵敏度；为今后在临床应用中快速鉴别诊断鸡传染性贫血病毒、禽网 状肉皮增生症病毒与禽自血病病毒A、C、D亚群提供可行性。 关键词：鸡传染性贫血病毒；禽网状内皮增生症病毒；禽自血病病毒；亚群；基因芯片；多重PCR 近年来，我国养禽业发展非常迅速，已成为我国畜牧业的 出现的分子生物学与微电子技术相结合的分析检测技术，目 支柱产业之一。可是随着养禽业的快速发展，各种内在及外 前已广泛应用于生物科学的多个领域，包括疾病的分子分型 在因素也正严重地威胁着养禽、Ip的健康发展，其中疫病已成 检测‘“、基因表达的检测‘…、病毒进化研究‘州等，对于病毒性 为威胁养禽业的头号大敌。虽然通过使用疫苗接种及药物控 病原体的检测，目前也已有较多报道…““。与传统方法相 制等手段，使禽类主要传染病的防制取得了一定的成效，但在 比，基因芯片具有快速、敏感、高通量的特点，可以平行地对大 各地鸡场的生产实践中免疫接种过的鸡群仍会不断发生各种 量病原进行同时检测-I“。 疾病，其中不容忽视的原因之一就是禽类免疫抑制病。禽免 因此本课题拟研究开发检测ALV、CIAV、REV的基因芯 疫抑制病是由单一或多种致病因素共同作用，导致鸡只免疫 片，能达到同步检测上述三种鸡免疫抑制病、并可同步区分 系统受损、免疫功能降低的疾病的总称。引起家禽常见的免 ALv A、C、D亚群的检测方法．为我国鸡免疫抑制病的净化与 疫抑制性病毒有鸡传染性贫血病病毒(c【AV)、禽白血病病毒控制提供技术支撑；为大批量样品的检测和大面积的流行病 (ALV)、网状内皮增生症病毒(REV)、传染性法氏囊病病毒 学调查提供快速、准确、高灵敏的检测手段。 (IBDV)、马立克氏病病毒(MDV)等”。1。其中鸡传染性贫 1材料与方法 血病(cIA)、网状内皮增生症(RE)以及禽淋巴白血病(AL)， 1．1材料 除了造成各自特殊病变(贫血、肿瘤)外，它们还具备垂直传 1．1．1主要试剂和仪器 播、亚临床感染，传统方法诊断较为困难等特性【6j。但就目 DNA提取试剂盒购自QIAGEN公司，质粒小题试剂盒购 前来看更好的防控手段是及时对鸡群中ALV、cIAV、REV检 白天根生化科技有限公司，PcR Mjx购自Pmmega公司，禽白 测并净化，切断其垂直传播的途径，以避免该病的扩散”1。 血病P27抗原检测试剂盒’J、AB亚群抗体检测试剂盒均购自 因此，加强便捷、快速