胃食管反流病中医证型GSTP1基因多态关联初步研究.pdfVIP

胃食管反流病中医证型与GSTPl基因多态关联的初步研究 李黎朱生探张辉 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院消化内科 上海市中医药研究院中西医结合临床研究所 胃食管反流病(GERD)是消化系统常见疾病，由于生活方式、饮食习惯等多种因素都可增加 本病的患病风险，因此GERD在全球的患病率呈不断上升的趋势，受到了消化病领域的共同关注· 随着研究的深入，一些证据提示我们遗传因素对GERD的发生可能有一定的影响，从遗传学基本 原理来看，个体患病的风险不同可以理解为由于DNA序列变异造成的“遗传素质”的差异使然。在 一个生物群体中，同时和经常存在两种或两种以上不连续的变异型或基因型，称为遗传多态性 (genetic 流性食管炎(1强)发生的遗传易感因素。 中医学倡导疾病“因人、因地、因时”的个体化辨证治疗模式符合基因多态性的特点，对中医证 型与基因多态间的相关性研究也引起了很多学者的关注。本研究在国内形成胃食管反流病中医证型 统一标准的背景下，对已采集的胃食管反流病患者生物样本进行分析，从遗传易感性角度，探讨胃 食管反流病中医证型与谷胱甘肽转硫酶PI基因多态间是否存在联系。 l对象与方法 1．1研究对象 1．1．1研究分组 照组：选自排除消化系统疾病的健康志愿者。 1．1．2西医诊断标准参照2006年lO月中华医学会消化病分会制定的中国胃食管反流病共识 意见。反流性食管炎分级标准参照1994年美国洛杉矶世界胃肠病大会制定的洛杉矶分类法。 1．1．3中医证型诊断标准：参照2009年中华中医药学会脾胃病分会‘胃食管反流病中医诊疗 共识意见》。 1．1．4纳入和排除标准(I)纳入标准：①符合疾病的西医诊断标准；②符合中医证型诊断标 准。(2)排除标准：①合并消化性溃疡、胃食管和十二指肠手术史、卓一艾综合症、原发性食道动 力疾患(如贲门失弛缓症，硬皮病，原发性食道痉挛)等疾病之一者；②怀孕或哺乳期妇女：③有 语言障碍者；④年龄18岁。 1．2研究方法 1．2．1临床样本采集 (1)详细记录入组病例的四诊信息、既往史、用药史、实验室检查等病史情况，并按入组先 后编号，输入epidata3．1数据库。 (2)参照有关文献，抽取实验组及对照组患者空腹静脉血2ml，抗凝处理，并置-70C保存。 1．2．2GSTPl基因型检测 TACTTGGCTGGTTGATGTCC．3’． (1)聚合酶链反应(PCR)：PCR反应体系中含：水12山，dNTP(each o ·5l 66℃30s和72℃2rain扩增35个循环，72℃延伸10rain，最后降温至4C得到PCR产物。 (2)酶切反应：取20ulPCR产物、Air／261l 后在37℃保温4h进行酶切反应。 1 2．3 GSTPI基因型结果 buffer)3山混匀后进行琼脂糖凝胶 限制性内切酶PCR产物25山加入上样缓冲液(10x[oading 电泳，上样于25％的琼脂糖凝胶中．100V电压．电泳2小时．并在计算机凝胶成像系统上观察酶 切效果、多态性和照相。GSTPI野生型(·ApA)只有440 bp～个片段(如图I中28、30、”、 bp二个片段．但 这二个片段因大小接近而在25％琼脂糖凝胶中无法分开(如图1中29例所示)：OSTPI杂和型 (·^，·B)则有三个片段(440bp，227bp和213bp)．在电泳图谱上可看到两条带(如图I中3I、 32、38、42、“倒所示)。 图1电泳图 l 2．4统计方法 采用SPSSl30统计分析软件．计数资料采用率表示。组间比较采用x2检验，设定PO．05为 有统计学意义。