艾灸对实验性RA家兔滑膜细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53表达影响.pdfVIP

201 1’l四JJl省针灸学术年会论文汇编 荧光定量PCR验证结果见差异基因荧光定量结果组间对比趋势图，由图可以看出，PCR验证结果 与芯片结果表达趋势基本一致．提示基因芯片检测完成质量较好。 3讨论 艾灸作用具有多途径、多层次、多靶点的特点，穴位是一个多层次的复杂的立体构筑，因而穴位对艾 灸刺激响应也应该是多层次、多因素的复杂过程。基因芯片技术不仅充分认识到了基因之间相互联系 的复杂性，更注重从分子水平辩证地研究整体的功能和联系，从细胞超微结构及分子相互作用来阐述生 命的物质基础，而且通过生物信息学分析，又可把局部的作用和整体状况联系在一起。因此，基因芯片 技术为穴位局部对艾灸刺激响应研究提供了极其重要的技术支撑，也符合中医学包括针灸这类强调整 体观的学科的研究需要。 本研究通过空白组和空灸组SD大鼠“足三里”穴位局部全基因表达谱对比分析构建了生理状态下 穴位局部对艾灸刺激响应的差异基因表达谱，共有217个基因参与构成；通过模灸组和模型组全基因表 达谱对比分析构建了病理状态下穴位局部对艾灸刺激响应的差异基因表达谱，共有498个基因参与构 成。这些结果，为我们提供了“足三里”穴位局部对艾灸刺激响应的初步的分子绘图，也为艾灸作用始 动效应的研究提供了潜在的研究靶点，比如本研究挖掘出的Hsp家族基因、娜家族基因等都是目前艾 灸作用研究中的热点。通过进一步的生物信息学挖掘我们得到了11个生理状态下差异基因显著富集 信号通路，21个病理状态下差异基因显著富集信号通路。综合分析可见，无论是生理状态下，还是病理 状态下“足三里”穴位局部基因表达谱对艾灸刺激的应答具有多基因、多信号通路的特点。但是我们仅 挖掘到了27个两种状态下共表达差异基因，说明不同机体状态下，穴位局部对艾灸刺激响应的差异较 大，主要体现在病理状态下，穴位局部对艾灸刺激响应的敏感性更强，这一点提示机体状态是穴位对艾 灸刺激响应的重要影响因素之一。我们还通过对不同状态下富集信号通路的对比分析初步探寻了不同 状态下差异基因响应特征及其生物学内涵，分析发现：生理状态下，“足三里”穴位局部对艾灸刺激应答 基因可能主要富集于代谢相关的信号通路，启动机体代谢应答；“足三里”穴位局部对艾灸刺激应答基 因可能首要富集于免疫相关信号通路，启动机体的免疫应答。该分析结果蕴含的生物学意义值得进一 步深入挖掘，而且为潜在靶点的深入研究指引了方向。不过，尽管本研究中严格RNA质检和RT—PCR 验证结果提示本研究芯片检测质量较为可靠，进一步引入生物学重复实验研究来进一步确证潜在的研 究靶点是有必要的。 艾灸对实验性RA家兔滑膜细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax、P53表达的影响 赵纪岚，张宝，刘旭光，王月，兰发惠，杨阳，张萍 (成都中医药大学，四川成都610072) 目的：观察艾灸对实验性类风湿关节炎(rheumatoid 2、Bax、P53表达的影响，希望更深入地探讨艾灸治疗类风湿的作用机理，为其临床应用提供新的理论基 础。 方法： 1．动物分组：兔42只，体重2．5±0．25kg，雌雄各半，每兔一笼，自由进食饮水，实验室温度16～ 20。C，湿度50％一70％。驯化饲养一周后，按性别、体重采用分层随机的方法分为空白对照组14只和 造模组28只，造模成功后再随机将造模组分成RA模型组和艾灸组，每组14只动物。 ·146． 201 l’四川省针灸学术年会论文汇编 2．造模：轻弯曲造模组动物双侧后膝关节，以膝关节髌骨下缘，膑韧带外测凹陷作为穿刺点，将弗氏 物相同方法注入等剂量无菌生理盐水。 、 3．艾灸治疗 造模后第7天开始治疗。艾灸组动物固定后，用艾粒灸双侧肾俞穴各5壮(参照《中国兽医针灸 学》动物穴位图谱)，每日1次，6天为1疗程，共治疗3个疗程，疗程之间休息l天。空白组、模型组每 日同法固定，但不进行艾灸治疗。 4．造模及疗效观测 用软皮尺于造模前、造模后第7天、治疗后第7、14、21天分别测定各组各动物双后膝关节周长作为 造模及疗效观察指标。 5．指标检测 于治疗后第21天，处死动物取膝关节滑膜组织，置于4％多聚甲