人参皂甙Rb1对培养小鼠小肠Cajal细胞起搏电流影响研究.pdfVIP

黄穗平徐蕾 广东省中医院 510120 近年来，运用胃肠动力学研究中医药成为热点。许多研究证明部分中药复方、单方、提取物、 单体等具有参与调节胃肠动力的作用。 人参是健脾益气的主要中药。帆人参中分高出来的人参皂苷被认为是人参主要的有效成分之 对胃肠递动力学的影响机制尚不完全明确。 本研究在细胞学水平上观察了^参皂甙Rbl对培养的小鼠小肠c哪砌细胞起搏电流影响：在组 织学水平实验与细胞学术平实验上观察了RbI对ICR小鼠小肠平滑肌自发性收缩的影响井探讨了 其机制。现摊告如下。 第—部分人参皂甙胁f对培养的小■小肠P,ajal细胞 起搏电渣影响的研究 1材料略 2宴验方法 2．1小鼠小肠c面m同质细胞的分离培养 如图1 图1．小鼠小肠Cajal问质细脆的分离培养过程 2．2小鼠小肠caj司甸质细胞的鉴定免疫组织学 2．3膜片锚实验技术 3结果 3．I培养的ICC细胞的鉴定 3L1培葬的小肠c嘲m间质细胞的形态学观察 培彝ICC24～72h后，在倒鼍显微镜下观察，可见已贴壁生长的细胞．或单个分散生长，或 以喇络式样生长，或以小肠组织碎片为中心向四周辐射状生长出成团的细胞．这些细胞具有共同的 ·47l· 墨一 叶村而甲町丽w州w≮ ……‘ …^ ¨V””Ⅳ”””¨”帆匕 图4人参皂甙Rbl对Cajal细胞起搏电流影响 ·472· 业 l… 删㈨忡M∥Ⅶ1㈣忡州L百 旦业业 l··” 州帅¨晰m帅。岬洲L 图5人参皂甙Rb]对Cajal细胞起搏电流影响 第二部分人参皂甙Rbl对IcR小鼠小晒平滑肌 自发性收缩影响的机制研究 1材料略 2实验方法 21组织准备与肌条实验 2．2细胞制各与电生理记录 2．3膜片钳实验技术“Ⅲ 3统计学分析 数据统计在SPSSl70中进行。实验结果统计采用同体对照t检验和两个样本均数的t检验。所有统 计结果皆以均数±标准误来表示，P 005为显著性差异界值。 4结果 41人参皂甙Rbl对ICR小鼠胃肠平滑肌收缩机制的影响 4．1 1单体人参皂甙RbI对小鼠小肠平滑肌自发性收缩的影响。 为了明确单体人参皂甙Rbl对小鼠小肠平滑肌的作用，本实验采用不同浓度的Rbl，观察它们 97±823％、 31％、57 Rbl均可抑制肌条收缩幅度 图6A 。收缩幅度分别下降到对照组的798Z+3 32770：5 6 B ∞ l_。 ；” i“ 豳瘩 阻d|] 图6n 5．+P 005Rbl与空白对照组比较 41．2TTx对人参皂甙Rbl抑制自发性收缩的影响 ·473 为明确人参皂甙Rbl对自发性收缩的抑制作用是否是通过内在性神经，即肠神经介导，使用 4umol／L 了神经阻断剂TTX。在用0 T了x预处理后，再给予50“mol／L人参皂甙Rbl，仍然可以抑 组的53 23％相 05 。 图7D．图8 比，差异无统计学意义 n 5。p 0 41．3TEA对人参皂甙Rbl抑制自发性收缩的影响 从电生理学角度考虑，引起平滑肌舒张的最常见的原因是细胞膜电位超槛化，而超极化主要通 过钾离子外流所引起，因此，为了验证Rbl对自发性收缩的抑制作用与钾离子通道的关系，使用 83±3 03±823 缩幅度抑制到对照组的90 54％，与单独给予50pmo[／L人参皂甙Rbl的抑制百分比42 ％相比，差异有统计学意义 n-5，p 005 。 图7B，图8 4144-AP对人参皂甙Rbl抑制自发性收缩的影响 5mmol／L预处理后，可以观察到肌条的自发性收缩 在用4-AP 电压门控性K+通道阻滞剂 0 03±8．23％相比．差异 照组的8910±519％．与单独给予50Ⅲnol／L人参皂甙Rbl的抑制百分比42 05 。 图7c，图8 有统计学意义 n 5．p 0 4I 5格列车脲对人参皂甙Rbl抑制自发性收缩的影响 的收缩幅度抑制到对照组的52 百分比4203±8 05 。 图7E，图8 23％相比，差异无统计学意义 rF5．p 0 。——————————————————E!二 !!二———————————————————————————一 图7 ARbl对肌条收缩的影响； B—E各阻断剂预处理后．Rbl对肌条收缩的影响 474 兽j葺l善 1二 图8Rbl与空白对照组比较，’P 005 TBA+Rbl、4-AP+Rbl与Rbl组比较#P 005 4．2膜片钳实验结果 本实验利用电压钳观察了人参皂甙Rbl对钾通道电流的影响。本实验主要选择了两种外向钾 电流，即钙辙活钾离子电流 IKA 和延迟整流型钾离子电流 IKv 。 4．2．1 Rbl对ICR小鼠小肠平 f 肌细胞对电压依赖钾离子电流 IKv 的影响 采用全细胞膜片钳的电压销模式，用含有EGTA10mmol／L的电极封接细胞形成全细胞后，膜 7l± 17