新奥霉素发酵液理化性质和提取方法的研究.doc

新奥霉素发酵液理化性质和提取方法的研究 摘要：新奥霉素是本实验室从一株诺尔斯链霉菌的发酵液中，分离得到的新型核苷类农用抗生素。本文通过对发酵液理化性质的研究表明，新奥霉素是一种水溶性抗生素，具有较好的紫外和热稳定性，适合在酸性条件下保存。探索了两种提取新奥霉素的工艺：新奥霉素发酵液经助滤剂过滤预处理后，①采用微滤-纳滤组合分离法可以获得活性收率90%以上的新奥霉素浓缩液；②采用4倍体积无水乙醇沉淀和两次正相硅胶柱层析，可以获得白色或淡黄色新奥霉素粉末。 关键词：新奥霉素 微滤 纳滤 提取 硅胶柱层析 Study on extraction methods and physico-chemical properties of fermentation broth of xinaomycin Abstract: Xinaomycin is a new nucleoside agricultural antibiotics isolated from the fermentation brth of streptomyces noursei by our laboratory. The physico-chemical properties of fermentation broth and the extraction methods of xinaomycin were studied. Xinaomycin is water-soluble antibiotics. It was stable to UV and heat. It was fit for storing in acidic conditions. The fermentation broth of pretreatment was obtained through filtration with filtration aid. Two extration methods of xinaomycin: ①The concentrated liquor of xinaomycin was obtained by using combination of microfiltration - nanofiltration with activity yield of 90%; ②The white or light yellow powder of xinaomycin was obtained by ethanol precipitation and silica gel column chromatography. Key words: Xinaomycin Microfiltration Nanofiltration Extration Silica gel column chromatography 近年来，农用抗生素的筛选和应用已成为农业微生物领域的研究重点，而利用放线菌产生的抗生素制备的新农药已逐渐成为无公害农药的主体 [1]。因此从放线菌的发酵液中寻找新的农用抗生素产物成为当前国内外的一个研究热点[2]。 核苷类由于具有多样的生物活性，在医疗农药方面都有重要应用核苷类低毒而且抗菌、杀虫抗病毒等方面，越来越受到关注。（streptomyces noursei）200910060121.4），经多轮诱变选育，已具有了工业开发价值。本文就新奥霉素发酵液的理化性质及其提取方法进行了研究，为新奥霉素的发酵生产和农业应用方面提供技术支持。 1 材料与方法 1.1 材料和仪器 菌种：由本实验室从攀西地区土壤中筛选得到的诺尔斯链霉菌（streptomyces noursei）XiAo-3。 生测指示菌：蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）购自云南省微生物研究所保藏中心。 生测培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。 发酵液：诺尔斯链霉菌（streptomyces noursei）XiAo-3经发酵罐发酵后提供。 试剂和仪器： 硅胶G薄层板、硅胶G200～300C18反相硅胶（YMC）GE WaterProcess Technologies），BUCHI-114型旋转蒸发仪,SBS-100型数控记滴自动分部收集器，高压液相色谱系统：SHIMADZU（岛津）液相色谱仪系统。 1.2 发酵液的预处理 发酵液中添加珍珠岩助滤剂，经过滤去除菌体和培养基残渣。 1.3 发酵液理化性质 1.3.1 热稳定性 各取10ml发酵液5支试管中，分别置于min、60min和90min，定时取出2ml发酵液留作生测样品，冷却至室温，管碟法测抑菌圈直径，每个样品重复3次。 1.3.2 pH稳定性 将发酵液用1mol/L HCl和1mol/L NaOH分别调节pH至1.0