妇科疾病中解脲脲原体、沙眼衣原体NesedPCR检测.pdfVIP

-84· 吴青平，黄晓红。李雯。张碧兰(福建省三明市第一医院，365000) 摘要： 颈炎、附件炎等疾病患者的阴道分泌物，应用nested 关键词： 妇科疾病；nPCR；解脲脲原体；沙眼衣原体 中图分类号：R711．3 文献标识码：B 文章编号：1006—9534(2004)05—0084—02 解脲脲原体(UU)3是柔膜体纲支原体目，支原体科，脲 原体属的一个种。它可引起非淋菌性尿道炎、子宫内膜炎、不 附件炎13例；尿道炎5例；盆腔炎4例；习惯性流产3例；宫 育症；沙眼衣原体(CT)一除了可致眼部疾患外。它还可侵犯 泌尿生殖道，主要引起非淋性尿道炎及官颈炎。为了探讨解 症2例；附件炎9例；宫颈炎2例；宫外孕4例。阳性总检出 脲脲原体(uu)、沙眼衣原体(CT)在本地区妇科疾病中的发 率为22．5％，详见附表1、附表2。 病率及其致病作用，我们采用Nesed—PCR技术检测妇科患 者宫颈分泌物．现将检测结果报告如下。 表1 393例妇科疾病患者uu—DNA检测结果 资料与方法 疾病种类—丽主竽L』魁叁争 1．标本来源：本院妇科门诊及住院就诊患者的宫颈分 泌物。 2．标本采集：8无菌棉拭插入宫颈内旋转取宫颈分泌 物．将棉拭置入内有0．5ml生理盐水的无菌试管中充分洗涤 后，丢弃棉拭．送检标本。 3．试剂提供：uu、CTNested—PCR试剂盒由无锡市克 隆遗传技术研究所提供。 表2 142例妇科疾病患者CT—DNA检测结果 4．模板制作：标本管置离心机内15000rpm／5min，吸弃 上清液。加裂解液A(0．5％非离子去污剂NP40)50以、裂解 疾病种类 一面jP二二』嘴 液B(浓度为10mg／ml蛋白酶K)溶液)2础，并置55℃保温 (消化标本)lh。然后移置95℃保温(灭活蛋白酶K)10min。 离心10000rpm／30s，其上清液即为UU、CT第1次nPCR模 板。 5．nPCR扩增方法：第一次：不同PCR反应液1．5／zl加 人相应的模板5vl及石蜡油30tA。稍离心，9312预变性2min， 93℃30s一55℃30s一72℃60s，循环35个周期，72℃延长 讨 论 5min。 第二次：将200肛lH20加入扩增管内，取出5弘l作第二次 解脲脲原体一(Ureaplasma 扩增模板，PCR反应液1．5pl加入第二次扩增模板5肛I及石 原体(chlamydia 蜡油30“1．稍离心，PCR扩增程序与第一次相同。 已被公认．它们不仅与泌尿生殖道感染有着密切的关系，可 6．产物观察：取第二次扩增产物10tA与2,ul溴酚蓝指示引起多种泌尿生殖道疾病．如非淋菌性尿道炎(NGu)、前列 剂混合．点样于2％琼脂糖凝胶。100V电泳20min，，在波长 腺炎、不育症等。还可导致妇科宫颈炎等疾病。国内有文献 302nm紫外灯下观察。出现与阳性对照267bp、450bp相同荧报道、在女性生殖道检测中，患者的UU—DNA阳性检出率 光条带者。即分别为uu、CT阳性者。 究结果与相关报道有所不同。文献报道认为CT主要引起泌 结 果 尿生殖道疾病和宫颈炎；各位学者对uu致病种类报道不 393人检测解脲脲原体(uu)，检出uu—DNAd阳性 (下转第90页) 万方数据 ·90· 例，患肝