原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
临床与实验病理学杂志990235
临床与实验病理学杂志
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL AND
EXPERIMENTAL PATHOLOGY
1999 Vol.15 No.2 P.178-179
不同组织中DNA提取及其影响因素分析
董明 袁媛 王建敏
关键词 DNA提取；血液；新鲜组织；冰冻组织
中国图书分类号 R342.3
文献标识码 A 文章编号 1001-7399(1999)02-0178-02
根据医疗科研的需要，我们分别从人全血、新鲜组织及OCT包埋冰冻组织中提取
DNA，提取的方法各有不同，特别是我们自己摸索了一套提取OCT包埋冰冻组织DNA
的方法。在实验过程中，分别总结了各方法的影响因素，供实验工作者应用时参考。
1 材料与方法
1.1 材料来源 本实验所用外周血、新鲜组织及OCT包埋冰冻组织均采自胃癌手术患
者。
1.2 外周血DNA的提取 采静脉血10 ml，加入细胞裂解液，离心弃上清，进一步溶解
.-1
L 醋酸钠及冷无
蛋白质后，置37℃水浴过夜，次日用酚/氯仿/异戊醇抽提2次，加3 mol
水乙醇沉淀DNA，再用TE缓冲液溶解DNA，置-20℃冰箱储存备用。
1.3 新鲜组织DNA的提取 从新鲜离体胃手术标本上取胃粘膜组织约0.2 g，将其剪
碎，加入DNA提取液(组织DNA提取液的有效成分为：Sucrose、20×SSC、10% SDS、
.-1
L EDTA)和蛋白酶K，置37℃水浴中振荡24 h，用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提2
500 mmol
次，加入醋酸钠，冷无水乙醇沉淀DNA，再加入TE缓冲液使DNA溶解。次日用RNA酶
作用3～4 h，重复抽提、沉淀DNA步骤，进一步纯化DNA。
1.4 OCT包埋冰冻组织DNA的提取
1.4.1 OCT的清除 从-20℃冰箱中取出冰冻组织块，置于盛有无菌TE缓冲液(pH 8.0)的
小平皿中，待其逐渐溶化，用小镊子将肉眼可见的半透明OCT剔除，再尽量切除沾有
OCT的组织，用无菌TE缓冲液反复冲洗3次，然后将组织剪碎并转移至离心管中。
1.4.2 粗提DNA 向上述离心管中加入DNA提取液5 ml混匀后，加0.7 ml蛋白酶K，置
. -1
min离心10 min，
37℃水浴振荡24 h，次日加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，3?000 r
-1
醋酸钠及冷无水乙醇沉淀DNA，用TE缓冲液溶解DNA后，
反复此过程后加入3 mol*L
置4℃冰箱暂存。
1.4.3 去除RNA 向含有DNA粗提物的离心管中加入RNA酶12 μl,置37℃水浴中震荡3
～4 h。
1.4.4 纯化DNA 从37℃水浴中取出离心管，加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液混匀，
. -1 .
min，离心10 min，移上层液体至新离心管中，重复上步至除尽蛋白，加入3 mol
3000 r
-1
L 醋酸钠及无水乙醇，见形成絮状物后弃上清，用70%乙醇洗DNA 2次，空气干燥5
万方数据
file:///E|/qk/lcysyblxzz/lcys99/lcys9902/990235.htm（第 1／3 页）2010-3-23 3:37:10
临床与实验病理学杂志990235
min，加入适当体积TE缓冲液，置4℃冰箱保存。
1.5 DNA含量测定及琼脂糖电泳
2 结果
经UV-260紫外分光光度计检测，从全血中提取
文档评论（0）