适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法最佳条件的研究.pdfVIP

维普资讯 沈阳农业大学学报 ，2008—06，39(3)：365—367 JournalofShenyangAgriculturalUniversity — — — — ， 2008—06，39(3)：365—367 适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法 最佳条件的研究 范海延 。，陈 捷 ，张春宇 。，郭 海 ，，林 英 - (1．沈阳农业大学 生物科学技术学院，沈阳 110161；2．上海交通大学 农业与生物技术学院． 上海 2011()1 3．水利部 水土保持植物开发管理 中心 ，北京 1(10038) 摘要：为建立适于黄瓜叶片蛋61质组分析的双向电泳方法 ，对黄瓜叶片蛋F_l提取方法、裂解缓冲液 、 等电聚焦 (IEF)参数进行研究 结果表明：丙酮法或 氯乙酸，丙酮法提取黄瓜蛋 白质较好 ，2一DE图谱 中蛋 白点较多 ；裂解缓冲液为 95m。卜L一-尿素， 2mo卜L～-硫 脲 ，1％二硫苏糖醇 (D ，2mmol·L 丁基磷 (TBP)，4％ 3-3【一(胆酰氨丙基)二 甲铵基1丙磺酸 内盐 (CHAPS)0．2％两性 电解 质 ， ， 0．002％溴酚蓝 ，0．25％ 吐温 20，10％异丙醇，5％甘油，10mmol·L 苯 甲基磺酰氟(PMSF)时，电泳网谱效果最好 ；IEF等电聚焦条件为 25O0oVh时 ，2-DE网谱蛋 白点多且清晰。 关键词：蛋 白质组 ：双 向电泳 ；黄瓜 中图分类号 ：$642．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—1700(2008)03—0365—03 A Two—DimensionalElectr0ph0resisProtocolSuitableforProteomicAnalysis ofCucumberLeaves FAN Hai—yan，CHEN Jie，ZHANG Chun-yu，GUO Hai，LIN Ying’ (I．CollegeofBioscienceandTechnology，ShenyangAgriculturalUnive~ity，Shenyang I10161，China； 2．SchoolofAgrku‘hureandBiology．ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai201101，China： 3．PlantMaterialsCenterforSoilandWaterConservation，MinistuofWaterResources，Beijing 100038，China) Abstract：A 2一DE ftow—dimensionalelectrophoresis)protocolsuited forthe separation ofproteinsfrom cucumberleaveswases． tablished．Protein extraction．1ysisbuffer an{lIEF parameterwere modified and improved to minimize markedly the interference by leafpigmentsand othernon—protein substances．thus resulting in satisfactory separation results．Cucumberleaves protein was extractedwith DI，acetoneor20％ w／vTCA in acetone，then resolubilized in lysisbufferf9．5