提高光滑球拟酵母乙酰辅酶A水平促进α－酮戊二酸合成.pdfVIP

维普资讯 l!—； 微生物学报ActaMicrobiologicaSinica 48(7)：874-878；4July2008 ISSN0001—6209；CN11-1995／Q http： oumals．im ．ac．cn 提高光滑球拟酵母乙酰辅酶A水平促进0c．酮戊二酸合成 梁楠，一，王淼，刘立明 ，堵国成，陈坚 (工‘业生物技术教育部重点实验室， 江南大学食品学院，无锡 214122) 摘要：【目的】为了了解光滑球拟酵母中乙酰辅酶 A含量对其碳代谢及其通量的影响。【方法】将来 源于酿酒酵母 中编码乙酰辅酶 A 合成酶 ACS2基 因过量表达于发酵法生产丙酮酸的生产菌株 Torulopsisglabrata中，获得了一株乙酰辅酶A合成酶活性提高 9．2倍(1．20U／mgprotein)的重组菌 glabrataACS2．1。【结果】与出发菌株WSH．IP303相比，重组菌 glabrataACS2．1：(1)能以乙酸 为唯一碳源在胞内积累0．94mmol／(L．gDCW)的乙酰辅酶A；(2)以葡萄糖为唯一碳源时胞内乙酰辅 酶 A浓度 、0．【酮戊二酸产量和c．KG／c 是出发菌株 WSH．IP303的3．22、2．05和 2．52倍；(3)在葡 萄糖培养基中添加 4g／L 乙酸，使乙酰辅酶 A 浓度、0．【酮戊二酸产量和 c．KG／c 是出发菌株 WSH．IP303的4．55、2．47和 3．75倍，0．【酮戊二酸浓度达到 l7．8g／L。【结论】这一结果表明，改变 细胞内关键辅因子的浓度能使碳代谢流的流向与通量发生改变，从积累丙酮酸转向过量积累0．【酮戊 二酸。 关键词：光滑球拟酵母；乙酰辅酶A合成酶 ；乙酰辅酶A 中图分类号：Q936 文献标识码：A 文章编号：0001．6209(2008)07．0874．05 辅酶A(CoA)及其衍生物乙酰辅酶 A作为重要辅 辅酶 A合成酶(ACS2)明显增强乙酸消耗速度，导致胞 因子，参与了微生物细胞内100多条合成与分解代谢 内乙酰辅酶 A节点的代谢通量增加4【]。Akamatsu等 途径 1【·，同时也是合成重要应用价值的精细化学品 在酵母中过量表达乙醛脱氢酶、乙酰辅酶A合成酶和 如酯类和脂质的前体 3【]。调节微生物细胞内辅酶A或 乙酰辅酶A水解酶 3个与乙酸代谢有关的酶 ，阐述了 乙酰辅酶 A的浓度或比率可以实现碳代谢流的调控 ， ACS2的过量表达明显减少了胞外乙酸的积累 ]。调节以 使碳代谢流最大化或快速化的导向 目标代谢产物或 乙酸为底物的乙酰辅酶A合成酶 ，是调控胞内辅酶A 合成新的代谢产物。美国Rice大学 SanKY研究小组 库形式及其水平的有效手段。 在E．coli中通过过量表达乙酰辅酶 A合成酶截断乙 光滑球拟酵母(Torulopsisglabrata)能以葡萄糖 酰辅酶 A的竞争途径4【]、过量表达泛酸激酶 5【]、丙酮 为碳源过量积累丙酮酸的原 因在于丙酮酸进一步降 酸脱氢酶系 6【等策略增加乙酰辅酶A含量，调控碳代 解为乙酰辅酶 A 的丙酮酸脱氢酶和丙酮酸脱氢酶系 谢流，实现了乙酸异戊酯生产的高产量、高产率和高 代谢旁路(由丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶、乙酰辅酶A 生产强度的统一 【。在酿酒酵母中过量表达肉毒碱乙 合成酶组成)受培养基中低浓度B所控制 1【刚。同时三 酰转移酶(CAT2)，可以调控胞内乙酰辅酶 A／辅酶 A 羧酸循环(TCA)中处于乙酰辅酶A下游的0．【酮戊二酸 的比例，导致胞内乙酰辅酶A的量提高，有助于发酵 (