2型糖尿病脑缺血再灌注损伤大鼠血浆脂联素的表达.pdfVIP

中国脑血管病大会2012 壁报交流 1材料与方法 脑组织片置于中性福尔马林溶液中外固定24h，常规酒精 1．1实验动物及分组 SPF级健康雄性SD大鼠，体重梯度脱水、组织经二甲苯透明后放入熔化的石蜡里浸蜡， 170—2009，购白武汉大学动物实验中心(实验动物质量合包埋制成蜡块，以备常规染色 格证：许可证号SCXK(鄂)2008—0004)，饲养于武汉大1．5大鼠血浆脂联素浓度检测 学中南医院实验动物中心SPF级环境中。将大鼠适应性喂 第2组大鼠各亚组各取4只分别于缺血前、再灌后 养1周后，随机分为两大组，第1大组用于HE染色观察缺 血脑组织形态分为3组：分为假手术组(n=4)，单纯脑缺 血再灌注组(n=24)，糖尿病脑缺血再灌注组(n=24)。采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠不 依据缺血后再灌注不同时间点随机分组，分为再灌注后 同时间点血浆脂联素的浓度，实验步骤严格按照试剂盒说 3h、6h、24h、48h、72h、7d共6个时间点，每个时间点明书进行操作。计算以标准品的浓度为横坐标，0D值为纵 4只大鼠。第2大组再次分为2组：单纯脑缺血再灌注组 坐标，计算出标准曲线的直线回归方程式，根据样品的0D (n=4)，糖尿病脑缺血再灌注组(n=4)。各组大鼠分别值，在绘制好的标准曲线上计算出样品的浓度，再乘以稀 于缺血前、缺血90min再灌后3h、6h、24h、48h、72h，释倍数，即为样品的实际浓度。 7d尾静脉取血。 1．6统计学处理 实验数据采用SPSSl3．0软件进行分析，所有数据均采 1．2主要试剂链脲佐菌素(STZ)，购自Sigma公司； 苏木素一伊红染色试剂盒，购自北京博奥森生物公司；大鼠 用均数±标准差表示，采用两个重复测量因素的方差分析， 脂联素酶联免疫吸附试剂盒，购自上海迪奥生物科技公司； PO．05差异有统计学意义。 1．3动物模型的制备 2结果 1．3．12型糖尿病大鼠模型的制备 2．1造模情况：与正常大鼠相比，糖尿病大鼠表现出 正常血糖大鼠给予常规普通饲料喂养，糖尿病组大鼠 不同程度的多饮多食、多尿、体重减轻、血糖明显增高等 给予高脂高糖饲料喂养，喂养6周后每只大鼠按30mg／ 糖尿病症状，且大鼠毛色污秽无光泽。脑缺血再灌注损伤 kg体重～次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ临用前需溶解在大鼠模型制备成功后，糖尿病大鼠较非糖尿病大鼠苏醒时 PH=4．5的0．1mol／L的柠檬酸缓冲液中)，注射前将大间明显延长，精神状态差，偏瘫程度严重。糖尿病大鼠死 鼠禁食不禁水12小时，注射后继续给予上述饲料喂养，3 亡率高于非糖尿病大鼠，实验中有8只糖尿病大鼠死亡，5 周后大鼠禁食12小时(不禁水)，采集大鼠尾静脉血检测 只非糖尿病大鼠死亡。 空腹血糖，给予29／Kg50％葡萄糖腹腔注射后2小时再次 2．2神经行为学评分：假手术组未见神经功能受损体 检测血糖，以空腹血糖≥7．8mmol／L，腹腔葡萄糖耐量试征，糖尿病合并脑缺血大鼠神经行为学评分(2．73±0．61) 验血糖≥11，lmmo]／L为2型糖尿病大鼠模型成功的判定标分较非糖尿病合并脑缺血损伤大鼠(1．58±0．36)分高， 准，剔除血糖未符合标准的大鼠。 且差异具有统计学意义(P(O．05)。(图1) 1．3．2单纯脑缺血再灌注损伤模型的制备 2．3HE染色脑组织形态学变化：假手术组大鼠细胞排 参考改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型， 列整齐，结构清楚，核仁明显。在缺血再灌注相同时间点， 手术前禁食12小时，不禁水，10％水合氯醛腹腔注射麻醉 糖尿病大鼠脑组织损伤较非糖尿病大鼠明显，光镜下可见 大鼠，沿颈部正中切开皮肤，沿左侧胸锁乳突肌之间向下 细胞核固缩、移位、溶解，胞浆疏、淡染，间质内炎性细 钝性分离，依次分离左侧颈总、颈内及颈