结合转移-陈大松.pptVIP

《近代生物学研究技术》实验 用三亲本杂交进行细菌质粒的接合转移 第一天内容： 受体、供体、辅助菌混合培养。 1、供体菌：E.coli DH5α(pMP2463) 含绿色荧光蛋白基因EGFP (庆大霉素抗性 Gm R ） 2、受体菌: 快生型大豆根瘤菌 HN01 （ Sinorhizobium fredii HN01 ） 3、辅助菌: E. coli MM294 (pPK2073)（壮观霉素抗性Spe R） 教师准备： 将受体、供体、辅助菌分别培养到对数期： E.coli (pMP2463) ：LB + Gm（ 20 μg/ml） 37OC震荡1夜； S. fredii ：TY, 28OC震荡培养2天 ； pPK2073： LB + Spe 50 μg/ml 37OC震荡1夜 学生操作（第一天） ： (1)吸取供体菌、辅助菌、受体菌各 0.4ml，都加入同一个1.5ml离心管内（1管/人），8000转/min 离心1分钟。 (2) 倒上清，向沉淀加 1ml TY液体，用tip上下抽吸，洗菌体，8000转/min离心1分钟，倒上清，留沉淀。 (3) 用镊子取灭菌滤纸片贴于已准备好的TY平板上，