含朱砂的万胜化风丹和氯化汞对大鼠肾转运体、肾汞蓄积和Kim―1表达的影响.docVIP

含朱砂的万胜化风丹和氯化汞对大鼠肾转运体、肾汞蓄积和Kim―1表达的影响 　　[收稿日期] 2013-10-31 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；贵州中药现代化专项（2010-5）；药物代谢平台项目（新药药理与毒理023）；研究生教育创新基地（黔科 2008-002）；遵义医学院博士启动基金（F-582） 　　[通信作者] *陆远富，教授，博士，研究生导师，主要从事药物代谢与药物毒理研究，Tel：（0852）8609623，E-mail：yflu@ 　　[作者简介] 朱琼妮， 硕士研究生，E-mail：nhuxiaoni@126.com 　　[摘要] 研究含朱砂的万胜化风丹（WSHFD）和氯化汞对SD大鼠肾汞摄取转运体（Oat1， Oct2），肾汞外排转运体（Mrp4， Mate2k）、肾汞蓄积和肾损伤分子1（Kim-1）的影响。发现含汞10倍量的万胜化风丹古方对大鼠肾汞蓄积及肾毒性远小于HgCl2，且其对肾转运体的作用小于HgCl2。而上述各指标在WSHFD0，WSHFD2和WSHFD3组无显著差异，表明在万胜化风丹中减量或去掉朱砂对其肾汞蓄积和肾毒性影响不大。 　　[关键词] 万胜化风丹； 氯化汞； 肾汞； 肾转运体； Kim-1 　　含朱砂的万胜化风丹曾是受保护的四大名药之一，由天麻、僵蚕、全蝎、天南星、荆芥、紫苏叶、苍术、雄黄、药母、麝香、檀香、朱砂、硼砂、巴豆霜、冰片等15味中药经独特的下窖发酵及风干工艺制作而成，用来治疗中风等疾病[1]。古方万胜化风丹含朱砂约为10%，朱砂为含汞化合物，其毒性备受人们关注[2-3]。近年来根据药典规定将朱砂用量减少约2/3，称为现代配方[4]。2013年5月，同仁堂40余种中成药因含朱砂（汞）超标，被香港卫生局禁售。但在中国大陆的中药店里，含朱砂的中成药比比皆是。含朱砂的中药真有那么毒吗？不含朱砂或将朱砂减量的万胜化风丹毒性会减少吗？肾脏是无机汞毒性的主要靶器官，故本实验用高于临床用量的万胜化风丹古方（WSHFD3），减量方（WSHFD2）和不含朱砂的方药（WSHFD0）与HgCl2（约10%古方汞量）口服给药1周，比较其肾汞蓄积，肾转运体及肾脏毒性基因表达，为含朱砂的万胜化风丹的安全用药提供毒理实验基础。 　　1 材料 　　1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠，体重（180±40） g，由重庆市第三军医大学提供，许可证号SCXK（渝）2012-005，饲养于清洁级动物中心，合格证号SYXK2011-004，适应1周后给药。 　　1.2 药品与试剂 万胜化风丹古方药，现代配方和不含朱砂的方药由贵州省万胜制药有限公司提供。氯化汞（美国Sigma公司）；Trizol，PCR引物[宝生物工程（大连）有限公司]；High Capacity cDNA Reverse Transcription Kits（美国Applied Biosystems公司）； iQTM SYBRGreen SuperMix（美国BIO-RAD公司）；mRNA纯化试剂盒（上海华舜生物技术有限公司）。 　　1.3 仪器 KCHG AFS-230E AFS双通道原子荧光光谱仪（北京科创海光）；实时荧光定量PCR仪（美国BIO-RAD）；多功能梯度PCR仪（德国Eppendorf）；全波长酶标仪（美国Thermo）；5417R型冷冻离心机（德国Eppendorf）；X-15R型冷冻离心机；Icycler IQ型实时荧光定量PCR仪（美国BIO-RAD公司）。 　　2 方法 　　2.1 动物分组与给药 30只雄性SD大鼠随机分为5组，每组6只：万胜化风丹不含朱砂组（WSHFD0，1.5 g?kg-1）、万胜化风丹现代配方组（WSHFD2，1.5 g?kg-1，含Hg 45.3 mg?kg-1）、万胜化风丹原方组（WSHFD3，1.5 g?kg-1， 含Hg 129.3 mg?kg-1）、氯化汞（HgCl2，18 mg?kg-1，含Hg 13 mg?kg-1）。氯化汞组含汞量约为古方组的10%。各组口服灌胃给药连续7 d，空白对照组给予等体积双蒸水。 　　2.2 肾指数测定 大鼠处死取出肾脏后，立即用滤纸擦干表面残血，称重，以相应质量计算出肾脏指数。肾脏指数=肾脏质量（mg）/体重（g）×100。 　　2.3 肾组织中汞蓄积量测定 称取约100 mg肾组织于消化罐中，加入5 mL浓硝酸，180 ℃烘箱中消化2 h，取出后用去离子水定容至50 mL。在贵州省理化测试中心用双通道原子荧光光度计进行检测。标准曲线的绘制方法同上，分别吸取10 mg?L-1的汞标准液稀释至0，2，4，6，8，10 ng?kg-1后立即进行测定。标准曲线Y=105.500X+4.933，r=0.99