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清开灵注射液类过敏反应的实验研究 　　摘要： 实验采用小鼠全身类过敏试验、大鼠皮肤类过敏试验及测量血液中组胺，VEGF，TNF-α含量来研究清开灵注射液致小鼠和大鼠的类过敏反应，为其临床用药安全提供参考。小鼠全身类过敏试验：ICR小鼠随机分为生理盐水（NS）对照组、阳性药Compound 48/80 （Comp）25 mg?kg-1组、清开灵注射液（QKLI） 3，6，12 mL?kg-1组（本实验所用QKLI为液体，故剂量单位选用mL?kg-1），各组分别一次性尾静脉注射含0.4%伊文思蓝（EB）的受试药，记录给药30 min后耳廓蓝染阳性率，对耳廓蓝染程度进行评分，测定耳廓伊文思蓝渗出量。大鼠皮肤类过敏试验：剃除大鼠背部和脊柱两侧的毛，经尾静脉注射含0.6%EB的NS 2 mL?kg-1，10 min后，在麻醉的情况下，沿脊柱两侧，皮内注射阴性对照NS、阳性对照Comp（0.5 mg，50 μL）、不同浓度QKLI （分别相当于清开灵注射液原液 12.5，25，50 μL），各组注射体积均为50 μL。给药20 min后记录各注射点的蓝斑直径。对血液中组胺，VEGF，TNF-α的影响：ICR小鼠随机分成NS组、Comp 25 mg?kg-1组、QKLI 12 mL?kg-1组。各组经尾静脉注射不含EB的受试物。给药30 min后，摘眼球取血，离心分离血清，采用ELISA方法测定。实验结果显示尾静脉注射QKLI 3，6，12 mL?kg-1后，小鼠耳廓出现不同程度的耳蓝染现象。提示QKLI可引起小鼠血管通透性增高，导致其发生类过敏反应；大鼠皮内注射QKLI（相当于原液 25，50 μL/点）时可导致注射点处形成与NS组相比直径较大的蓝斑（P0.01）；静脉注射QKLI后可引起血液VEGF明显增高，组胺有一定增高趋势，TNF-α未见增高。实验证明了QKLI有显著的使血管通透性增高的作用，从而诱发大鼠、小鼠而发生类过敏反应，其类过敏反应可能与组胺和VEGF释放有关。 　　关键词： 清开灵注射液；类过敏反应；血管通透性 　　[收稿日期] 2013-09-18 　　[基金项目] 国家科技支撑计划项目（2006BAI14B05）；国家“重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09301-005） 　　[通信作者] * 梁爱华，Tel：（010）E-mail： liangaihua@ 　　[作者简介] 崔宏玉，硕士研究生，E-mail：cuihongyu2624@163.com 　　清开灵注射液（QKLI）是由胆酸、珍珠母、猪去氧胆酸、栀子、水牛角、板蓝根、黄芩苷、金银花8味中药经现代制备工艺精制而成的中药注射剂，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的功效。QKLI的主要成分有胆酸、猪去氧胆酸、栀子苷、黄芩苷、绿原酸等。随着清开灵注射液在临床上的广泛应用，其不良反应报道也逐渐增多。文献报道清开灵注射液发生的不良反应多发生在首次用药及注射后30 min内[1-2]。国家药品不良反应监测中心在第1期、第21期分别通报了清开灵注射液的不良反应，由其引起的严重不良反应报告例次数在中药注射剂引起严重不良反应例次数排名中连续3年位于前三名。所以研究清开灵注射液导致的不良反应情况，对临床用药有重要意义。本研究利用前期已经建立的类过敏实验动物模型，研究清开灵注射液的类过敏反应，为临床安全用药提供参考。 　　1 材料 　　1.1 动物 成年健康ICR小鼠，雄性，SPF级，体重22～25 g，许可证号SCXK（京）2006-0009；成年健康Wistar大鼠，雄性，200～220 g，SPF级，许可证号 SCXK（京）2006-0009。以上动物均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。 　　1.2 药品和试剂 清开灵注射液（QKLI），为某药业有限公司产品，批Compound 48/80（Comp，批号40M4047）和伊文思蓝（批号E2129）购自Sigma 公司；甲酰胺购自国药集团化学试剂有限公司，批号生理盐水（NS）为石家庄石药有限公司产品，批号110507406。 　　2 方法 　　2.1 小鼠全身类过敏试验 将适应性饲养1 d后的ICR 小鼠按体重随机分组，每组 10 只，分组包括：阴性对照（生理盐水NS）组、阳性对照（Comp 25 mg?kg-1）组，QKLI 3，6，12 mL?kg-1（按照小鼠与人体表面积折算，3个剂量分别为临床剂量的1/2，1，2倍）。各组受试物均用NS配制，并含有0.4%EB。各组均一次性尾静脉注射20 mL?kg-1，给药后30 min，观察并记录每组出现耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数、耳廓蓝染面积。耳廓蓝染面积（S）按照以下方法进行评