银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.docVIP

银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 　　[摘要] 目的：研究银丹心脑通及其主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护性作用。方法：采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。SD大鼠分为空白组（control），模型组（model），银丹心脑通全方组（YDXNTC），银杏提取物组（GBE），丹参醇提物组（SM-E），丹参水提物组（SM-H），混合物组（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片；MC），银杏+丹参醇提物配伍组，银杏+丹参水提物配伍组，丹参醇提物+丹参水提物配伍组。离体心脏平衡后，空白组正常灌流70 min；模型组正常灌流10 min，停灌30 min，复灌30 min；给药组以含有相应药物的灌流液正常灌流10 min，余同模型组。实验过程中全程记录心电图，观察室性心动过速/室颤（VT/VF）发生率，心脏停跳时间，复跳时间，正常律动时间及心率失常持续时间。复灌结束后，将心肌匀浆，测定SOD活力，MDA，LDH，CK-MB和心肌钙蛋白I（cTnI）释放量。结果：①银丹心脑通全方组，丹参醇提物，丹参水提物，混合物能够延长心脏停跳时间，缩短复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间，但对VT/VF发生的发生没有明显作用。银杏提取物对减少复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间有较好作用，同时能够改善VT/VF的发生。除银杏+丹参水提配伍对心脏停跳时间无明显影响以外，主要成分配伍对心脏停跳时间，复跳时间，正常律动时间及心率失常持续时间均有良好作用，且银杏+丹参醇提对VT/VF发生也有明显作用。②银丹心脑通全方组，银杏提取物，丹参醇提物，银杏+丹参醇提物配伍组，丹参醇提物+丹参水提物配伍组能够提高心肌SOD活力，降低MDA含量；丹参水提物，混合物，银杏+丹参水提物配伍组仅使MDA含量降低。③银丹心脑通全方组和丹参水提物减少了LDH的释放。银杏提取物，丹参醇提物，丹参水提物及银杏+丹参醇提物配伍降低了CK-MB含量。④银杏+丹参醇提物配伍抑制了cTnI的释放。结论：银丹心脑通、主要成分及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，其作用机制可能与抗氧化，减轻钙超载有关。 　　[关键词]银丹心脑通；主要成分配伍；心肌缺血再灌损伤；保护作用 　　冠心病是导致人类死亡的主要病因之一，再灌注是急性心肌梗死最有效的治疗手段，但再灌注损伤是影响再灌注治疗的重要因素[1]。心肌在经历缺血后，当再恢复血液供应时，由于能量衰竭，氧自由基生成，钙超载，炎症反应，细胞凋亡等因素，缺血心肌及周围组织会受到进一步的损伤[1-2]。因此预防及减轻再灌注损伤已成为抗心肌梗死的热点问题。 　　银丹心脑通是由银杏，丹参，灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片精制而成的天然苗药制剂[3-4]。临床上主要用于冠心病心绞痛，心律失常，心肌梗死等[3]。其相关研究主要集中在临床应用及疗效观察方面，有关药效物质基础的研究尚未报道。本实验采用离体心脏灌流模拟缺血再灌注损伤研究了银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，为探讨其主要作用物质基础奠定基础。 　　1材料 　　1.1药品与试剂 　　银杏提取物（GBE），丹参醇提物（SM-E），丹参水提物（SM-H），混合物（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片；MC），均由贵州百灵制药股份有限公司提供。乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（批、丙二醛（MDA）试剂盒（批、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批，均购自南京建成生物工程研究所。肌酸激酶同工酶（CK-MB）试剂盒（批、心肌钙蛋白I（cTnI）试剂盒（批，均购自上海蓝基生物科技有限公司。 　　1.2动物 　　健康SD雄性大鼠，250～300 g，SPF级，购自北京大学医学部实验动物科学部，合格证号SCXK（京）2011-0012。 　　1.3仪器 　　Langendorff离体心脏灌流系统（西班牙PanLab公司）；FI55002蠕动泵（法国吉尔森公司）；MP150多导生理记录系统（美国Bipac公司）；DFM-96γ放射免疫分析仪（合肥众城电子系统有限责任公司）；MK3酶标仪（赛默飞世尔科技有限公司）。 　　2方法 　　2.1提取物制备[5] 　　2.1.1 银杏提取物制备 银杏叶粉碎，稀乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩物加至大孔吸附树脂柱上，1次用水及不同浓度乙醇洗脱，收集相应洗脱液，回收乙醇，真空干燥，粉碎成极细粉，总黄酮质量分数25.4%，K-H液配制，用于实验。 　　2.1.2 丹参醇提物制备 乙醇回流提取2次，过滤，合并滤液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成极细粉，丹