细菌16SrDNA荧光定量PCR法分析溃疡性结肠炎患者肠道菌群变化.pdfVIP

维普资讯 - 566 胃肠病学和Hr病学杂忠 2008年7月第 17卷第 7期 ChinJG塑lr01nt!r0 !t011 1 ! !：!! ：! 细菌 16SrDNA荧光定量 PCR法分析溃疡性结肠炎患者肠道菌 群变化 白 鹏 ，吕愈敏 ，顾 芳 北京大学第三医院消化科 ，北京 100083 【摘要 】 目的 应用文时荧光定量 PCR技术对溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)患者的粪便菌群进行定量分析 。方法 研究 对象包括30名UC活动期 、30名 UC缓解期患者及 22名正常对照，收集其粪便标本。根据细菌 的l6SrDNA序列设计双歧杆菌属、 乳酸朴菌属 、肠球菌属和大肠杆菌的特异性引物。待测粪便标本提取细菌基 因组 DNA，进行实时荧光定量 PCR反应测定 l6SrDNA 拷 贝数，分析不同细菌 的数量。结果 UC活动期 患者与正常对照相 比，粪便 中双歧杆菌 (8．45±0．92 9．10±0．78)、乳酸杆菌 (8．11±0．94 s8．694-0．55)数量 明显减少 (P0．05)，大肠杆菌(9．88±1．34 s9．7l±0．92)和肠球菌 (7．74±0．63 7．6l± 0．49)无 明显变化(P0．05)；而 UC缓解期患者粪便中4种细菌数量(双歧杆菌9．15±0．81，乳酸杆菌 8．5l±0．80，大肠杆菌9．54 ±1．64，肠球菌7．90±0．46)均与正常对照无明 差异 (P0．05)。结论 UC活动期患者粪便双歧杆菌、乳酸杆菌数量较正常对照明 显减少 ，而 UC缓解期患者粪便菌群 正常对照无明显差异。提示肠道菌群失调可能是具有 UC遗传易感性个体发病的触发因素。 【关键词 】 溃疡性结肠炎；肠道菌群 ；16SrDNA分析 ；实时定量 PCR 中图分类号：R575．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：l006—5709(2008)07—0566—06 收稿 日期 ：2008-02—28 16SrDNA．based fluorescentrea1．time PCR analysisofthevariation offecaImicrobiota in pa· tientswith ulcerativecolitis BAIPeng．LV Yumin．GU Fang DepartmentofGastroenterology，PekingUniversityThirdHospital，Beijing100083，China 【Abstract】 Objective ToanalyzethefecalmicrobiotaofUCpatientssubjectsusingfluorescentreal-timePCR． Methods FreshfecalsampleswereobtainedfrompatientswithactiveUC (n=30)，UCinremission(n=30)，and healthyvolunteers(n=22)．A setof16SrDNA-targetedgroup-orspecies—specificprimersforBifidobacterium spp．， Lactobacillusgroup，Enterococcusspp．andEscherichiacoliweredesigned．16SrDNA copynumbersofbacterialgenome DNA extractedfiom fecalsampleswerequantifiedbyreal—timePCR Ioanalyzebacterialamounts．Results Thelevelsof Bifidobacterium spp．(8．45±0．92 s9．10±0．78)andLactobacillusgroup (8．11±0．94 s8．69±0．55)inactive UCsamplesweresignificantlylowerthanthoseofhealthycontrols(P0．05)，whereasEnterococcusspp．(7．74±0．63 s7．61±0．49)andEscherichiacoli(9．88±1．34 9．71±0．92)levelsdidnotshow significantdifference (P 0．05)