miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及对Bcl-2表达的调节.pdfVIP

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2011Feb；27(2)：265—9 ·265 · miR一143对宫颈癌 HeLa细胞增殖和凋亡的影响 以及对Bcl一2表达的调节 刘立鹏 ，于潇华 ，王晓春 ，郭小芳。，田 智 ，龙 昱 ，粟 敏 ， 罗弱估 ，黄春霞 ，胡桔红 ，吴新华。，宋元达 (1．长沙医学院生化教研室，湖南 长沙 410219；2．中南大学湘雅医学院医学检验系， 3．中南大学湘雅医学院妇产科，湖南长沙 410013；4．中南大学生命科学与技术学院生化系，湖南 长沙 410013) 中国图书分类号：R329．24；R329．25；R342．2；R737．330．22 机制可能与某些microRNAs调控的疾病相关基因表 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2011)02—0265—05 达有关。通 过 PICTAR5、PICTAR4、PITA、RNA22、 摘要：目的 研究 miR一143对宫颈癌 HeLa细胞增殖和凋亡 TargetScan等软件，我们查到Bc1．2是miR一143的预 的影响，探讨 miR一143对宫颈癌 HeLa细胞系 Bcl-2蛋 白及 测靶位点，为进一步研究 miR一143在癌症发生发展 mRNA表达的调节作用。方法 将 miR-143，anti．miR一143以 中的作用，本实验通过构建miR．143和anti．miR．143 及microRNA空对照高表达质粒用脂质体转染进宫颈癌 He— 高表达质粒，用脂质体将该质粒转染宫颈癌 HeLa La细胞中，MTF法检测宫颈癌 HeLa细胞增殖 的变化 ，His． tone／DNAELISA检测细胞凋亡；Westernblot和 RT．PCR检 细胞，检测细胞中Bcl-2蛋 白和mRNA表达情况，并 测Bcl一2蛋白和 mRNA的表达情况 ；双荧光素酶报告基因法 观察 HeLa细胞增殖和凋亡的变化情况，双荧光素 检测 miR-143的靶位点。结果 MiR-143抑制 HeLa细胞的 酶报告基因法检测miR一143的靶位点。 增殖，促进细胞凋亡 ，而anti—miR-143促进 HeLa细胞增殖， 1 材料与方法 抑制细胞凋亡；高表达的miR一143抑制 Bc1．2蛋 白的表达， 1．1 材料 胎牛、小牛血清，杭州四季青生物有限 anti—miR一143增加Bc1．2蛋白的表达量 ，而Bcl-2mRNA的变 公司；RPMI1640细胞培养基，美国Gibco公司；HeLa 化很小；miR一143抑制 Bcl-23端的荧光素酶的活性，突变 细胞，中国医学科学院基础医学研究所 ；质粒提取试 miR-143与 Bc1-2的预测结合位点后，荧光素酶的活性恢复。 剂盒，天根生化科技 (北京)有限公司；总 RNA提取 结论 MiR一143至少部分通过打靶 Bcl-2抑制宫颈癌 HeLa 试剂盒 (TRzol法)，Invitrogen公司；RT试剂盒，美国 细胞增殖，并且促进 HeLa细胞凋亡。 MBI公司；PCR试剂盒，天根生化科技有限公司；Li． 关键词：miR-143；Bcl一2；增殖；凋亡；HeLa细胞；宫颈癌 pofectamine 2000转染试剂盒，Invitrogen公司；嘌 呤霉素，Sigma公司；引物合成，上海生工有限公司； microRNAs是一类非编码的小分子 RNA，越来