不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺对BHK-21细胞凋亡的影响.pdfVIP

不 同浓度葡萄糖和谷氨酰胺对 BHK一21细胞凋亡的影响 武发菊 ，尚勇 良 ，安芳兰 ，董文教 ，宋玉霞 ，鲍士兵。，陈苗苗 ，牟克斌 ，刘学荣 。 (1．中农威特生物科技股份有 限公司 ，甘肃兰州 730046；2．中国农业科学院兰州兽 医研究所 ，甘肃兰州 730046； 3．天津市北辰 区畜牧水产局 ，天津 300400) 摘 要 ：研究葡萄糖和谷氨酰胺两种重要 营养物质对 BHK一21细胞凋亡的影响 ，在 BHK一21细胞体 外 培养过程 中，加入不 同浓度的葡萄糖和谷氨酰胺 ，每 隔24h取样细胞计数，活性分析和细胞 凋亡率的测定。 结果发现 ，当葡萄糖浓度降至 0mmol／L~4mmol／L，谷氨酰胺浓度降至 0mmol／L~lmmol／L时，细胞生 长速率降低 ，细胞培养至 48h就开始大量凋亡，细胞活性也随之 下降。可见 ，葡萄糖和谷氨酰胺的浓度对 BHK一21细胞的活性和细胞 凋亡有着显著性的影响。 关键词 ：BHK一21细胞 ；葡萄糖；谷氨酰胺 ；细胞凋亡 中图分类号 ：$852．33 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2011)03—0051-05 动物细胞培养过程 中的细胞 自然凋亡是细胞受 细胞长满单层后 ，用胰 酶消化 ，倾去胰 酶，加入培养 内外环境压力的影 响而发生的现象 ，这些环境条件 基 ，用移液管反复轻轻吹打成单细胞悬浮液，按l：3 决定着细胞 的生死存亡[1]。在常规生物反应器构 的接种比例传代培养。将长好 的贴壁细胞消化后 ， 造中，氧的供给、生长因子、毒素 、pH、剪切力 、细胞 以细胞密度为 0．75×10个 ／mL转入摇瓶进行扩大 密度 、培养基 中有毒代谢物 的积累及微生物污染等 培养。待细胞形态 良好 ，以每瓶 100mL培养基均 均可诱发细胞凋亡 ，特别是培养基 中某些重要营养 匀接人 250mL三角瓶 中(接种密度为 1．0×10 成分的耗竭是导致体外培养细胞凋亡的主要因素 ， 个 ／mL)，分别加入一定量的葡萄糖浓缩液，使葡萄 如血清 、葡萄糖 、谷氨酰胺及氨基酸 的耗竭 ，影响培 养体系的活细胞密度和 目的产 品的生产效率L4]。 糖浓度分别为 15、1O、7．5、4．0、2．4、1．2mmol／L，标 但 不 同细 胞 系 稍 有 不 同[6罐]，因此 ，本 试 验 针 对 记为① 、② 、③、④、⑤、⑥ ，其 中①为对照组，置于 37 BHK一21细胞生长过程 中人为地使葡萄糖和谷氨酰 ℃培养箱内培养 。每隔 12h取样 ，计数细胞并作生 胺缺乏 ，考察细胞活性和细胞凋亡率 ，为 BHK一21细 化分析 ，本试验重复进行 3次。 胞培养基 的优化 、细胞活性 的提高奠定基础 。 1．2．2 不 同浓度 的谷 氨 酰 胺 对 BHK一21细胞 生 长 1 材料与方法 的影响 试验方法 同上 ，在 已准备好的细胞液中加 1．1 材料 入不同浓度的谷氨酰胺 ，即 2、1．5、0．8、0．4、0．1、 BHK一21C13—2P细胞购 自ECACC，第 lO代 ， 0．05、0mmol／L，标记为① 、② 、③ 、④ 、⑤ 、⑥ 、⑦ ，其 中农威特生物科技股份有限公司研发部扩大培养并 中①为对照组 ，置于 37℃培养 。每隔 12h取样 ，计 保存 ，试 验细胞 已传 16代 。培养 基 为 自制 的 数细胞并作生化分析 ，本试验重复进行 3次。 GMEM十F68，并 添加 70mL／L的胎牛血 清，血 清 1．2．3 细胞计数 用细胞计数仪计数细胞 ，测细胞 为兰州荣晔生物技术有限责任公司产 品。