简并PCR在肠道病毒血清型鉴定中的应用.pdfVIP

广东医学 2011年2月第 32卷第3期 GuangdongMedicalJournal Feb．2011，Vo1．32，No．3 · 291 · 简并 PCR在肠道病毒血清型鉴定中的应用术 林裕龙 ，温坤，王压娣 ，晋晶，车小燕 南方医科大学珠江医院医学检验中心 (广州 510282) 【摘要】 目的 探讨共有序列简并杂合寡核苷酸引物PCR(CODEHOP—PCR)在肠道病毒血清型鉴定中的 临床应用价值。方法 以CODEHOP—PCR检测经实时荧光 RT—PCR鉴定为 EV71和 CA16手足 口病患者 的临 床样本和病毒分离培养细胞上清的肠道病毒VP1基因片段，经琼脂糖凝胶 电泳并回收、测序 ，与Genbank提供的 序列比较，确定肠道病毒的血清型。结果 CODEHOP—PCR后的序列分析表明，所有的EV71毒株和 CA16毒株 与近几年国内报道的部分毒株同源性在 96％以上 ，其血清分型结果验证了实时荧光RT—PCR分型结果的准确 性。结论 CODEHOP—PCR合并测序用于肠道病毒血清型的准确鉴定，与传统的病毒分离反血清中和试验相比， 具有更快速 、准确 的优点。 【关键词】 共有序列简并杂合寡核苷酸引物；肠道病毒；血清型；手足口病 TheapplicationofconsensusdegeneratehybridoliogonucleotideprimerPCR inidentificationofenterovirussero- tpe． LINYu—long，WENKun，WANGYa—di，JINjing，CHEXiao—yan．CenterofClinicalLaboratoryDiagnosis， ZhujiangHospital，SouthernMedicalUniversity，口g如D 510282，China 【Abstract】 Objective Tostudytheclinicalsignificanceofconsensusdegeneratehybridoliogonucleotideprimer (CODEHOP)PCRinidentificationofserotypeofenteroviruses．Methods VP1genefragmentsofenterovirusweredetec— tedbyCODEHOP—PCRinclinicalspecimensofpatientswithhand，footandmouthdisease(HFMD)andsuspensionsof virusisolation，respectively．ThePCR productswerepurifiedwithagarosegelandsequencedforserotypingofenterovirus withcomparisonwithsequencesprovidedbytheGenbank．Results ThesequenceassayafterCODEHOP—PCR showed thatEV71andCA16traitsshared morethan96％ ofhomologywith enteroviursreposedbydomesticstudiesinrecent years．TheserotypingresultswithCODEHOP—PCR demonstratedtheaccuracyofreal—timefluorescentRT—PCR．Con- clusion CODEHOP—PCR combinedsequencingcanbeadoptedto identifyserotypesofenteroviruses，providingamore rapidandaccuratemethodthanviursisolationfollowingneutralizationtest． K【eywords】 consensusdegeneratehybridoligonucleotideprimer；enteroviurses；serotype；hand，footandmouth djsease 肠道病毒71型 (EV71)和科萨奇病毒 A组 16型 以探讨该简并 PCR技术在肠道病毒血清型鉴定 中的 (CA16)是引发手足 口病 (hand，footandmouthdisease， 临床应用价值。 HFMD)的主要病原 ，因此 HFMD的实验室诊断主要 l 材料与方法