噬夏孢欧文氏菌GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶相互作用的研究.pdfVIP

第 26卷 第 1期 青 岛大 学 学报 (工 程 技 术 版 ) Vol_26No．1 2011年 3月 JOURNALOFQINGDAOUNIVERSITY (ET) M ar．201 1 文章编号 ：1006—9798(2011)01—0066—05 噬夏孢欧文氏菌 GGPP合成酶与八氢番茄 红素合成酶相互作用的研究 提 婕 ，张 蕾，刘 敏 ，汪靖超 ，张行行，郭道森，李荣贵 (青岛大学生物 系天然色素实验 室，山东 青岛266071) 摘要：GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶是噬夏孢欧文 氏菌类胡萝 卜素合成代谢中的 两个关键酶。本研究将编码 GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶的基因 crtE和 crtB共 转化大肠杆菌或将 crtE、crtB及编码八氢番茄红素脱氢酶的 crtI共转化大肠杆菌，IPTG 诱导其表达，然后利用亲和层析、凝胶过滤层析纯化重组蛋 白。Westernblotting分析结 合 N～末端序列分析表明，GGPP合成酶与八氢番茄红素合成酶以两种复合体的形式存 在 ，而八氢番茄红素脱氢酶则不能与这两种酶形成稳定的复合体 。 关键词：噬夏孢欧文 氏菌 ；GGPP合成酶；八氢番茄红素合成酶；复合体 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 类胡萝 卜素(carotenoids)是一类呈现黄色 、橙色或红色的植物色素 ，它们在 自然界广泛存在于各种植物 中，在动物和微生物中也有发现。类胡萝 卜素由类异戊二烯化合物，通过尾一尾相连的 2个二十碳单位构成 四十碳的分子母体碳架，并从 中衍生出许多不同的化合物。类胡萝 卜素是植物和微生物光合系统的重要组 成部分 ，在植物光合作用中起辅助色素的作用 ，具有吸收和传递电子的能力，可以清除紫外胁迫下光合作用 中产生的叶绿素三线态和单线态及超氧阴离子等 自由基u ，对植物起重要的保护作用 。许多类胡萝 卜素 是维生素 A的重要来源 ，又是强抗氧化剂，具有一定的癌症预防功效。随着不同生物类胡萝 卜素合成基 因 的相继克隆和合成途径 中相关酶的性质研究的不断深入 ，为最终揭示类胡萝 卜素合成酶促反应机理提供 了 便利，也为利用微生物发酵来获取不同种类的类胡萝 卜素提供了可能。所有的类胡萝 卜素均通过类异戊二 烯化合物或萜类化合物途径合成。IPP(异戊二烯焦磷酸)是该途径的前体物质 ，在植物和微生物 中，类胡萝 卜素合成起始主要有两种途径 ，在真菌和植物细胞液 ／内质网上 ，IPP南乙酰 CoA经 MVA途径合成 ，而在 细菌和植物质体 内，IPP由丙酮酸和三磷酸甘油醛通过 DOXP(1一脱氧一D 酮糖一5一磷 酸)途径产生 ]，3个 IPP分子通过 GGPP合成酶与一个二 甲基二磷酸合成产生 20个碳的GGPP(栊牛儿基栊牛儿焦磷酸)。2 个 GGPP在八氢番茄红素合成酶作用下形成第一个无色的类胡萝 卜素——八氢番茄红素。八氢番茄红素 经过连续的脱氢反应，共轭双键延长 ，直至形成链孢红素 ，番茄红素 。番茄红素在不同环化酶的作用下分别 生成 a一胡萝 卜素、8一胡萝 卜素 ，在 a．j3一胡萝 卜素的C4(C4’)位置引入酮基和 (或)C3(C3’)位置引人羟基以 及在 一环上引入 C(5，6)一环氧基后 ，则形成结构更为复杂 的叶黄素 。噬夏孢欧文 氏菌是一种植物病原 菌，其玉米黄素二糖苷合成途径是最早被阐明的类胡萝 卜素合成途径之一 ，参与代谢的多个相关酶的编码基 因也被克隆l5]，其 中基因crtE编码 GGPP合成酶，crtB编码八氢番茄红素合成酶，crtI编码八氢番茄红素脱 氢酶，crtY基因编码番茄红素 j3环化酶 。汪靖超等一 分别克隆了crtE和 crtB基因，并在大肠杆菌 中成功 表达了这两个基因，研究了其编码酶的理化性质 。南于 目前 GGPP合成酶和八氢番茄红素合成酶结构还不 收稿 日期 ：2O10—10—02 基金项 目：山东省 自然科学基金 资助项 目(Y2008D25)；山东省优秀中青4t-f：b研奖励基金资助项 目(2002) 作者简介 ：提婕 (1984一)，女 ，山东青岛人，硕士研究生 ，研究方 向为微生物_厂程 。 通讯作者 ：李荣贵 ，教授 ，博导。E