精子密度与平衡时间对0.25ml细管猪精液冷冻效果的影响.pdfVIP

，l、 g黝论文集 精子密度和平衡时间对0．25ml细管猪精液冷冻 效果的影响 梁鸿斌。李晶李伯函郭勇刘云海倪和民 (北京农学院动物科学技术系，北京102206) 和不同平衡时间(0．5、I、2、3h)对猪精液冷冻效果的影响。试验采用0．25mi细管进行精液冷冻，以精子活力、 畸形率、质膜完整率和顶体完整率作为解冻后精子检验指标。结果显示，0．5x109个／ml猪精子冷冻解冻后，精 畸形率和质膜完整率较其它三组无显著差异(舢．05)。由此得出如下结论，猪精子密度为0．5×109个／ml，适宜 的平衡时间为2h，用0．25mi细管冷冻可获得较好的冷冻效果。 关键词：猪精子精子密度平衡时间精液冷冻 精液冷冻和人工输精技术的应用及推广，是上个世纪以来家畜繁殖领域的重大创新和革命， 对于充分发挥良种公畜的遗传品质以及保护公畜遗传资源均具有极其重要的应用价值。但到目 前为止，猪冷冻精液生产由于解冻后精子活力低、受胎率低等原因，使得猪冷冻精液技术一直 停留于实验室阶段，难在生产中大范围推广应用。因此，深入系统地研究猪精液冷冻机理和生 产的关键技术，已经成为国内外养猪业生产中亟待解决的问题，对于丰富家畜精液冷冻研究的 知识也具有重要意义。 精子密度的研究是精液冷冻保存技术关键技术之一，通常精子密度分为高密度、中密度、 低密度三种。在猪精液冷冻的研究中，精子冻存密度一般为(5～10)x108个／ml，人工授精所需 液，含精子量l×109个／ml，解冻后进行人工授精，获得了较好的繁殖效果。Saraviat21研究报道， 以2x109个／ml的密度冻存猪精子，冻后活力为37％-46％。精子密度受冷冻承载工具体积的限制， 很难到达输精量的需要，因此研究猪高密度冷冻将很有意义，高密度精液使其精子活动空间变 小，降低了精子的活动量和耗氧量，增加了精子营养需求。这将有可能缓解冷冻过程中对精子 的损伤，提高冷冻效果。目前国内外对于这方面的报道很少，还需更多的研究来证明。 平衡时间是猪精液冷冻前必要的冷冻程序，目的是使精子有一段适应低温的过程，同时使 甘油充分渗透进精子体内，达到抗冻保护作用。在所有家畜中，公猪的精子对冷休克最敏感， 低温打击严重影响精子的活力。缓慢的降温有利于提高精子对低温的耐受性。在室温下将精液 ’资金项目：“十一五国家科技支撑计划”项目“荣昌猪资源保护体系及关键技术研究”【项目批准号： 2007BAD51801．1．2】 作者简介：梁鸿斌(1979．)，男，硕士生，研究方向：动物产科及胚胎工程。 58 A “格拉姆杯”提高母猪年生产力暨第四届全国猪人工授精火键技术研讨会g黝 静止一段时间对解冻后精子活力有显著提高(P_0．01)13]。随着平衡时间的延长，对低温打击的 抵抗能力逐渐增强，Butled4】通过实验认为，猪的精子在室温放置几个小时可获得对抗冷休克的 能力，在平衡2～7ll后，大部分精子提高了抗冻力。GuthrieHD【51等(2005)发现平衡时间从3h 增加到24h对使用冷冻解冻精液进行人工授精的23d妊娠率没有明显的影响，但是胚胎的数量 从15枚降低到9枚，回收可用胚胎的比率从73％降到47％。 鉴于以上现状，本试验在0．25ml细管猪精液冷冻基础上，研究了不同精子密度和不同平衡 时间对猪精液冷冻解冻效果的影响，旨在探索优化猪精液冷冻程序，提高冷冻效果。 1材料与方法 1．1猪精液来源 采自北京顺义浩邦种猪场的皮特兰种公猪。 1．2主要试剂 葡萄糖、柠檬酸钠、甘氨酸等，试验所用试剂，除特别指明外，均购自国内。Tris(Sigma)， BSA(Sigma)。 1．3精液的采集 采用手握法或假阴道法采精，用4层灭菌纱布或专业滤纸过滤胶状物，采精后进行常规检 查，并根据精液浓度用稀释液稀释，精液在17C条件下1h内运抵实验室，并检测精子的活力、 质膜完整率和项体完整率。最后取活力在0．7以上，密度“中”，畸形率15％以下的精液用于冷 冻保存试验。 1．4精液的稀释与平衡 精液在室温静置m，然后1500r／min离心lOmin，弃上清液。采用二次稀释法进行稀释，先 水定容至100m1)作1：1(v／