利用CTC染色比较猪精子不同体外获能方法.pdfVIP

中困畜牧兽医学会兽l廷产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会论文集 利用CTG染色比较猪精子不同体外获能方法 梁鸿斌，牛嘉颖，李品，孙洋，郭雪丹，刘云海，郭勇，倪和民．． (北京农学院动物科学技术系，北京，102206) 摘要：为了探讨不同方法对猪精子体外获能的影响，本实验以猪的新鲜精液为研究对象，分别 结果表明，采用肝素上游法，孵育40min处理后精子的获能比例显菥高于其他各处理组(PO．05)， 说明肝素上游法可以较好地诱发猪精子在体外获能。 关键词：猪：精子；体外获能；金霉素(CTC)染色 雄性哺乳动物刚射出的精子通常并不具备受精能力，它们必须在母畜生殖道内或者适宜的外界 环境中“预孵或预处理”一段时间才能获得受精能力，该过程在生殖生物学上被称为精子获能 (sperm 研究者会在培养基内添加相应的获能诱导物米促进精子的获能，并籍此来模拟哺乳动物的精子体内 获能过程。在猪精子获能的研究中，前人仅以钙离子载体法利肝素上游法这两种方法分开进行了试 验，并没有系统的加以比较，应用几种方法来比较猪精子获能还很少见报道。因此本试验拟采用肝 素上游法、钙离子载体法和咖啡因法这三种方法诱导猪精子获能，利用CTC法对其获能效果进行检 验，以此比较不同方法对猪精子体外获能的差异，为改善猪精子体外获能以及相关的体外受精技术 提供一些参考。 1．材料和方法 1．1猪精液来源 采自北京顺义浩邦种猪场的皮特兰种公猪。 1．2试剂 serum albumin)、肝素、DABCO CTC(金霉素，chlortetracycline)、BSA(牛血清白蛋白，Bovine ionophomA23187)，均为美国Sigma公司产品，其余均为国产优级纯试剂。 1．3精子体外获能处理 实验——对照组：精液不经任何处理，直接染色观察。 500 实验二——肝素上游法：从采集的猪的新鲜精液中抽取约5mL置于灭菌锥形离心管中，以1 drain离心10min后弃上清液，放入肝素获能液，震荡混匀后，以45。的角度放入C02培养箱中， min，70rain，平I|120rain后，吸取上层含高活力精子的液体用CTC方法染色，观察获 分别孵育40 能效果。 实验三——钙离子载体诱导法：从采集的猪的新鲜精液中抽取约5mL置于灭菌锥形离心管中， p rain 以1500ffmin离心10min，离心后从底部抽取0．5mL的精液，然后加入钙离子载体ll，作用l 和2008年度北京i}『久学!l三科学研究与创业行动计划项f．1． l：_竹．1hb@sina．c硼l [作者简介】粱鸿斌(1979-)，男。在读硕十研究生．研究方向{动物产科及胚胎丁程。F．-wuli C通讯作者】倪和民(1962-)。男．副教授．研究方向：动物产科及胚胎工程E一眦“：nihemingyahcx．colll．cn． 89 中国奁牧善医学会善茨产辩学努会第五燕全体会}义第+|+次学零l嚣讨会论文集 屠用含有BSA麓获能液稀释20倍以终．1|：钙离子载俸的佧羽，然震以1500r／min离心10rain去姓上 清液，静浚40rain，沉淀用C代方法染色。 实验四——咖啡因诱导法：从采集的猪的新鲜精液中抽取约5ml置于灭菌锥形离心管中，以 1500 rain，70 中，分别孵育40 min，和120min后，吸取上层含高活力精予的液体用CTC方法染色，观 察获能效果。 1．4获能精子的评价 绿色荧光，精子头部剐萋3种不霹的荧光染色类囊，印F型、B燮矧AR黎。F型为来获能且顶体 完整的精予，整个精子头部呈强烈的黄绿