五倍子单宁酸的提取、降解菌株筛选及代谢产物研究（摘要）.pdfVIP

58 生 物 质 化 学 工 程 第49卷 · 硕士毕业论文介绍 · 五倍子单宁酸的提取、降解菌株筛选及代谢产物研究(摘要) Extraction and Screening of Tannic Acid Degradation Strains and Corresponding Metabolites(Abstract) 闵凡芹(1．中国林业科学研究院，北京 100091；2．中国林业科学研究院林产化学工业研究所，江苏 南京 210042) 五倍子是倍蚜类 昆虫在漆树科 (Anacadiaceae)植物盐肤木 RhuzchinensisMil1．、青麸杨RhuspotanniniiMaxin．或红麸 木上形成的虫瘿，为我国特有的林产品。其主要药效成分单宁酸及单宁酸水解产物没食子酸均具有广泛的工业应用，市 场需求量巨大。传统上将五倍子中提取的单宁酸通过碱法、酸法水解制备没食子酸，具有设备腐蚀严重及污染环境等缺 点。因此探索五倍子单宁酸高效提取及绿色无污染的没食子酸生产工艺具有重要的应用价值。 本研究建立了五倍子单宁酸超声、微波、负压提取的响应面优化模型，比较了3种提取方法在提取温度、液固比、单 宁酸提取率等方面的异同。超声辅助提取五倍子中单宁酸的优化工艺条件为：液固比38：1(mL：g)、提取时间32min、提 取功率250W，单宁酸提取率为66．0l％，与模型预测值 (63．563％)的相对误差为3．85％，因而由该模型推测得到的最优 工艺参数对实际的预测较为可靠。微波辅助提取五倍子单宁酸的最佳优化条件为：微波功率600W、液固比32：1(mL：g)、 提取时间7min、提取温度62℃，单宁酸提取率为65．13％，与模型预测值 (63．80％)的相对误差为2．1％。负压提取五倍 子单宁酸的优化工艺条件为：提取温度55℃、液固比24：1(mL：g)、提取时间30min，单宁酸提取率为66．56％，与模型 预测值(67．353％)相对误差为 1．18％。3种提取方法的回归方程显著 ，相对误差均5％，表明预测值与试验值之间具 有较高的拟合度，可用于实 颅洲，为五倍子单宁酸提取新工艺的产业化提供了有效借鉴。在三种提取工艺中，五倍子 单宁酸的提取率均为65％以上，差别不大，但由于微波辅助提取与超声波辅助提取技术但需要一定的设备投人，这在一 定程度上加重了生产成本，在大规模工业生产中的应用价值需要进一步研究；负压的低温沸腾效应可加速植物细胞壁的 破碎，从而有效降低提取所用液固比及提取温度，能有效防止高温引起单宁酸结构破坏及氧化的发生 ，此方法下所得单 宁酸提取率在三种提取方法中最高，且所得单宁酸提取物在产品杂质含量及色泽方面优于其它两种提取方法，是较具潜 力的单宁酸提取方法。 为建立微生物降解五倍子单宁酸生产没食子酸的方法，以五倍子单宁酸为诱导物，通过平板划线从五倍子水提取液 自然生长的菌落中分离纯化出16株菌。通过平板变色圈及TLC初筛及以单宁酸降解率、没食子酸积累浓度、单宁酶活 力为指标进行复筛，筛选出单宁酸的高效降解菌株lhs一1。通过传统的形态学鉴定，包括在土豆培养基、察氏培养基、单 宁酸培养基上的菌落形态及土豆培养基上的菌丝形态，以及以18srDNA序列特征分析为依据建立的系统进化树，发现 菌株 lhs一1与AspergillusnigerHKS11及Aspergillussp．LQ21亲缘关系最近，相似度最高，结合 《真菌鉴定手册》，将其鉴定 为曲霉属，并可能属于该属中的黑曲霉变种。 采用3因素3水平的Box—Behnken响应面设计法对菌株 lhs一1的发酵条件进行优化，测定培养温度、培养基初始 pH、 培养时间对该降解五倍子单宁酸生产没食子酸的速率(即单宁酶活力)的影响。结果表明：菌株 lhs一1最适培养温度为 31℃、培养基初始pH为5．0、最适培养时间为50h。在该最适条件下，菌株 lhs一1单宁酶活力可达 1．17U·mL～。为了 进一步研究菌株 lhs-1发酵降解五倍子单宁酸的代谢产物，应用甲基化裂解气质(Py—Gc—MS)分析 了单宁酸标准品、五倍 子水提取物及菌株 lhs一1发酵液裂解产物的异同，通过与Nist02标准质谱库比对，结合质谱解析，共指认其中17种化合 物，并按面积归一法计算出各化合物的相对含量。结果表明三种样品的甲基化裂解产物均可分为线性和苯环类两种，其 中线性化合物可能是葡萄糖的甲基化裂解产物，苯环类化合物可能来源于没食子酸及没食子酸与葡萄糖形成的酯键和 两个没食子酸形成的缩酚羧键的裂解。