野生和栽培管花肉苁蓉的遗传多样性分析.pdfVIP

世界中医药学会联合会中药专业委员会首届学术研讨会论文集 野生与栽培管花肉苁蓉的遗传多样性分析 崔光红1陈敏1黄璐琦1刘铭庭2 (1中国中医研究院中药研究所，北京100700； 1) 2中科院新疆生态与地理研究所，乌鲁木齐83001 摘要：目的：野生与栽培管花肉苁蓉的遗传多样性研究。方法：采用随机扩增多态DNA (RAPD)方法对管花肉苁蓉(Cistanche 人工栽培居群的123个个体进行了遗传多样性研究。利用POPGENEl．31版软件分析群体的 遗传多样性。结果：用10个随机引物共扩增出清晰谱带87条。野生居群平均多态位点百分 率27．59％，各居群多态位点百分率从19．54％到25．29％，其中安迪尔居群的最高25．29％。 两个人．T栽培居群的多态位点率仅为13．79％和11．49％。用UPGMA法聚类可知，4个野生 居群聚为一类，2个人工栽培居群聚为另一类，表明野生居群与人工居群间已发生了明显的 遗传分化。结论：栽培管花肉苁蓉遗传背景单一，再次强调野生管花肉苁蓉保护的重要性。 关键词：管花肉从蓉；RAPD；遗传多样性；保护。 管花肉苁蓉Cistanche 有“沙漠人参”之美誉，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效11】。在我国仅分布于新疆天 山以南塔克拉玛干沙漠周围各县，其分布与寄主柽柳属Tamarix植物不完全同步，其他地区 如新疆北部、甘肃、青海、宁夏、内蒙古、陕两等地的柽柳属植物均不寄生，自1959年首 先在塔克拉玛干柽柳的根部发现后【2J，管花肉苁蓉逐渐成为全国肉苁蓉药材的主要来源植物 [31，ff,iE式被《中国药典》2005版收剥11。然而随着肉苁蓉需求量的急剧增长，其野生资源 受到掠夺式的采挖，现已被列为我国濒危保护植物物种14】。 为了保护脆弱的沙漠生态，实现管花肉苁蓉的可持续利用，本课题组承担了国家“十五” 攻关项目“管花肉苁蓉的繁育研究”课题。经过数年的研究，管花肉从蓉人工繁育已获得成 功，目前正处于人面积推广种植阶段。然而，在产业化生产时如何防止物种的衰退，以及如 何尽快恢复有限的野生居群，保存珍贵的野生种质资源，是实现其可持续利用急需解决的问 题。解决这一问题的基础和依据是对其野生和人工栽培居群的遗传多样性进行比较。本研究 运用RAPD技术【51对管花肉苁蓉的4个野生居群和2个人工栽培居群进行研究，分析两者遗 传多样性的差异，以期为制定野生居群的保护策略提供科学的依据，同时为管花肉从蓉种植 基地的建设提供遗传学的指导。 1材料和方法 1．1材料 管花肉从蓉野生居群采自新疆民丰县和于田县。民丰县为目前管花肉苁蓉产量最人的地 区，素有“大芸之乡”的美称，分布有密度最人，野生林相较为完整的群落。采样点民丰县 113 世界中医药学会联合会中药专业委员会首届学术研讨会论文集 安迪尔、萨吾则克、牙通古孜和于田县大河沿均为主产区，分别位于安迪尔河、叶亦克河、 牙通古孜河以及克里雅河的下游，居群间相距50kin以上。人工居群采自新疆于田县大芸种 植场和奥依托格拉克。除奥依托格拉克居群仅有10个样晶外，其余居群均随机取样19-27 个，样品置于硅胶中快速干燥后，用丁DNA提取(表1)。 1．2 DNA的提取 总DNA提取方法用高盐、低PH法【6l。DNA样品经分光光度计检测DNA模板的浓度， 用l％ 的琼脂糖凝胶电泳，EB染色、紫外灯下观察照相，电泳DNA带清晰、拖尾较少的用于RAPD 分析。 1．3 RAPD引物的筛选 ItL的反应体系进行扩增筛选； 用上海生工(Sangon)公司150条随机引物(10bp)，25 每条引物用2个不同居群的模板再加一个灭菌双蒸水作空白对照，将扩增条带清晰、多态性 强、重复性好的10条引物用丁全部管花肉苁蓉样品的扩增，即：S1141，S1146，Sl183， S1208，S1500，$2032，S2042，$2052，$2059，S2155。 表l 管花肉苁蓉采样的位置 1．4 PCR扩增及产物检测