石蜡切片HE染色的体会.pdfVIP

· 167 · · 经验交流 · 石蜡切片 HE染色的体会 蔡晓雯，沈武成 福建省肿瘤医院病理科 ，福州 350014 摘要：目的 探讨病理组织HE制片中，组织经过取材固定 、脱水 、透明、浸蜡、包埋、石蜡切片之后，通过严格苏 木素、伊红染色这一环节的技术操作、提高石蜡切片的HE染色质量为准确的病理诊断提供优质的liE切片。方 法 临床工作中，经过常规取材的病理组织，通过一系列的组织处理，病理专用仪器的切片再经过染色剂苏木 素、伊红的染色，二甲苯透明，中性树胶封固制作成优质的HE片。结果 HE切片色彩鲜艳透明，细胞核呈蓝 色，间质呈深浅不等的橙红色，核 、质对比清晰。结论 通过对石蜡切片苏木素、伊红染色过程技术的改进，组织 细胞核、细胞质染色清晰度得到显著提高，使 HE切片质量的优质率达90％以上。 关键词：混合固定液；石蜡切片；HE染色；分化；返蓝 中图分类号：R446．8 文献标识码：B 文章编号：1672—3422 2011 0l-0167-02 临床的病理诊断，经过一个多世纪的发展 ，出现 高。细胞核呈蓝色，间质呈深浅不等的橙红色， 了大量的辅助诊断，但是优质的HE切片仍是最可 核、质对 比度好。克服了以往切片色彩对 比度欠 靠的依据。优质的切片制作需要经过一系列技术流 佳、细胞核模糊发灰等不 良现象，使 HE切片质量 程，这些流程互为联系，互为影响，任何一项技术处 的优质率达90％以上。 理不当都直接影响切片质量，造成最终的观察诊断 3 讨论 困难。本文仅对石蜡切片的HE染色这一环节浅谈 点滴体会，以共同探讨，以不断提高HE制片质量。 石蜡切片，未经 HE染色前 ，用光学显微镜观 察，仅能见到细胞及相关组织的简单轮廓，远不能 l 材料与方法 满足观察及诊断需要。组织切片只有经过染色 1．1 材料 ①福建省肿瘤医院内送检的病理组织； 后 ，不 同的组织成分在染色剂 的作用下呈现 出不 ②混合固定液：中性福尔马林 甲醛 100ml、磷酸氢二 同的颜色，产生了不同的折射率，使组织和细胞 中 钠6．5g、磷酸二氢钠4g、蒸馏水 900m1 ；③苏木精染 各种成份在光学显微镜下的分辨率得以提高，镜 液：苏木精 lg，无水乙醇 10ml，蒸馏水200ml，硫酸铝 下才能观察到清晰的组织细胞的形态和结构，得 钾20g，氧化汞0．5g，使用前每 100ml加入冰醋酸3～ 到正确的诊断。 4ml；④分化液：1％盐酸酒精；⑤ 1％醇溶性伊红液：lg 染色在 HE切片制作过程是关键 的一个环节。 伊红，80％乙醇10ml，用时加 1滴的冰醋酸。 染色过程是染色剂和组织细胞的相结合，是一个 1．2 方法 常规组织处理①取材 ：1．0～1．5era× 十分复杂的反应过程，这一过程既有化学作用又 1．0～1．5era×0．2～0．3cm；② 固定 ：10％的中性福 有物理作用，是二者综合作用的结果0。 尔马林 固定 18～24h；③脱水 ：梯度 乙醇 中处理 苏木素是一种天然的碱性染料，为淡褐色，易 12h；④透明：二甲苯浸泡 2～2．5h；⑤浸蜡 ：65℃石 溶于乙醇也溶于热水 ，其本身并没有着色能力。 蜡浸泡3～4h；⑥包埋：自动包埋机包制；⑦石蜡切 染色时首先经过氧化，生成苏木红，苏木红分子与 片：取3～4urn的石蜡片裱贴于载玻片上；⑧脱蜡： 媒染剂 硫酸铝钾 中的铝离子结合形成带正电荷 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精清洗至水化；⑨苏木精 呈碱性的蓝色色淀 J。细胞核主要 由脱氧核糖核 染色：浸染 10～15rain、水洗 ；⑩分化、返蓝：1％盐 酸组成，其双螺旋结构中的外侧带负电荷呈酸性， 酸酒精分化数秒、水洗、饱和碳酸锂蓝化数秒。流 很容易与带正电荷呈碱性 的苏木红蓝色色淀结合 水冲洗 15～30min；⑩伊红染色：1％醇溶性伊红浸 而被染色。但染液配制或使用不当都有可能造成 染5～15s；⑥常规脱水、透明、封片。 核浆共染。原因有：①染液配制时，冰醋酸加人量 不正确 ；②加温染色温度太高，增强了物理性染色 2 结果 作用 ；③试剂用久 了，有效成分减少 ，仅存有物理 通过 以上程序制作的病理组织 HE切片，色彩 性染色作用 。 鲜艳透 明，细胞核、细胞质的清晰度得到显著提 苏木素染色之后，用水洗去未结 转 169页 JournalofMedica1Forum Vo!．32 No．1 Janua~2011 ． 169 ． 织的缺血缺氧和能量代谢障碍，引起神经元及神 治疗颅脑外伤具有 良好的疗效，HBO可以显著提 经胶质细胞变性、脑实质软化、坏死，加重脑水肿， 高颅脑外伤的治愈率，减少致残率，提高患者的生 导致恶性循环。一方面HBO治疗能够改善脑损伤 活质量。 后微循环障碍，有效提高血