BPH1对前列腺间质细胞增殖和胞外基质蓄积的影响.pdfVIP

BPH-1对前列腺间质细胞增殖 和胞外基质蓄积的影响 1 1 1 2 2 1 吴荃 ，刘宇 ，石建党 ，刘树业 ，王克明 ，张琚 1南开大学生物活性材料教育部重点实验室（300071） 2天津市第三中心医院（300170） email：zhangju@ 摘要: 本文研究了前列腺增生上皮细胞系 BPH-1 在有或无雌激素刺激的情况下，其条件培 养液对间质细胞的影响。用不同浓度的雌二醇处理 BPH-1 ，收集条件培养液（conditioned medium, CM ），用其刺激间质细胞。用MTT 法检测间质细胞的增殖状况，用实时定量 RT-PCR 检测纤维粘连蛋白和Ⅳ型胶原 mRNA 的表达水平，用放射性免疫法和 ELISA 分别检测Ⅳ型 胶原和纤维粘连蛋白的蛋白水平。结果显示经雌激素刺激的 BPH-1 CM 能促进间质细胞的 增殖；有或无雌激素刺激的 BPH-1 CM 均能明显上调间质细胞Ⅳ型胶原的表达，而且这种 调节作用能被 TGFβ 中和抗体抑制。提示：BPH-1 条件培养液能够促进间质细胞胞外基质的 蓄积；雌激素可通过影响前列腺上皮细胞分泌的活性因子间接促进间质细胞的增殖。 关键词: 上皮－间质相互作用， 雌二醇， 增殖， 胞外基质， TGFβ 1.引言 良性前列腺增生（benign prosatatic hyperplasia, BPH）是老年男性的常见疾病，老 年男性雌/雄激素比例升高是前列腺基质增生的重要诱因之一。上皮－基质相互作用在激素 应答中起着重要的作用。雌激素除了直接作用于间质细胞外, 还可能通过调节前列腺上皮细 胞分泌的活性因子间接影响间质细胞的生物学行为。 为了研究在雌/雄激素比例升高的情况下，前列腺增生组织的上皮细胞对间质细胞的影 响，我们分别用 MTT，实时定量 RT-PCR，ELISA 等方法检测了 BPH-1 CM 对间质细胞增殖和 胞外基质蓄积的作用。培养前列腺间质细胞 2. 材料与方法 2.1. 材料与试剂 良性前列腺增生组织取自经耻骨上前列腺摘除术切除的组织标本，由 天津市第三中心医院提供；BPH-1细胞系由奥地利因斯布鲁克大学Klocker教授惠赠；新生牛 血清、马血清、 DMEM和DMEM/F12培养基为Gibico产品；胰岛素、转铁蛋白和雌二醇为 Sigma公司的产品；MTT染料为BBI公司产品；Trizol为Gibco BRL公司产品；逆转录酶AMV 1 本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（项目编号：20020055026 ）和国家自然科学基金（项目编 号）资助 1 为Promega 公司产品；Taq 酶、dNTP和随机引物为TaKaRa 公司产品；纤维粘连蛋白ELISA 检测试剂盒为武汉博士德公司产品；Ⅳ型胶原放射性免疫检测试剂盒为北方生物技术研究所 产品。 2.2. 条件培养液的制备 良性前列腺增生的上皮细胞系BPH-1在10%牛血清DMEM培养 -9 -8 -7 至30 －40 ％，换为DMEM/F12无血清培养液，培养液中分别添加0, 10 M ，10 M和10 M -9 -8 -7 雌二醇(Estrodial, E2) ，48小时后收获CM ；在DMEM/F12 中分别加入10 M ，10 M和10 M雌 二醇，37度孵育48小时作为对照培养液。在用TGF β抗体中和时，预先在对照