NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及其机制的研究.pdfVIP

NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及机制研究。 黄波，龙颖，唐艳，肖方竹，让蔚清，周平坤+ (南华大学公共卫生学院衡阳421001) 摘要：目的研究NU7026对肝癌细胞(HepG2)的放射增敏作用，为开发新的抗癌和放射增敏 药物提供理论依据。方法western DNA—PKcs活性的影响，以1一I-IAX表达检测细胞DNA受损的情况，微核细胞实验观察染色体损伤， 克隆形成实验观察对细胞株的放射敏感性的影响。结果DNA—PKcs在肝癌细胞中呈高表达，NU7026 长辐照后细胞的修复时间，NU7026能明显降低放射后细胞的克隆形成率。结论NU7026对肝癌细胞 有放射增敏作用，其作用机制与抑制DNA—PKcs活性有关。 关键词：NU7026；放射增敏；DNA—PKcs；DNA修复 肝癌是危害居民生命健康的前3位最主要恶性肿瘤之一Ⅲ。约70—80％的肝癌患者需要接受放射治 疗。肝癌恶性程度高，易转移、复发，手术切除的病人中约50％会出现复发或远处转移口1。提高肿瘤 对放射治疗的敏感性，提高其治疗效果，成为肿瘤放射治疗研究领域中的重点。本文主要研究NU7026 对人肝癌细胞HepC2增殖、DNA—PKcs表达及细胞辐射敏感性的影响，该化合物开发成为一种有效的 抗癌和辐射增敏药物提供理论依。 1材料和方法 1．1材料 0％胎牛血清的DMEM 细胞：人肝癌细胞(HepG2)、正常肝细胞L02由本实验室保存，在含1 Modified (Dulbecco’sEagle (C17H15N03，吗啡啉类物质，Sigma公司)，DNA—PKes抗体(Santa (Abcam公司)，H2AX(Serl39)(CST公司) 1．2微核实验 辐照前加入终浓度为20斗mol／L的NU7026) 将辐照后12h的3组细胞常规消化后，吹打分散成单个细胞，0．075molflKCI液低渗离心，以甲 醇：冰醋酸=3：1固定30min，离心，弃上清，加入少许固定液，混匀细胞，滴2-3滴于玻片上，自 然晾干，吉姆萨染色5-30min，冲洗后晾干，镜检。 1．3 WesternBlot检测DNA-PKcs蛋白表达 528 X 将指数生长的L02和HepG2用PBS洗涤两次，常规消化细胞，离心后收集细胞(约1106)于 管中，一70。C保存备用； Western 化。 1，4检测DNA—PKcs磷酸化位点$2056的表达 blot 20斗mol／l,4Gy1射线照射后0．5h收取细胞，western HepG2细胞在照射前2h加入NU7026 检测DNA—PKcs磷酸化位点$2056的表达，同时检测13一actin是否均一。步骤同上。 1．5 H2AX(Setl39)蛋白表达检测 Phospho—Histone mol／L的NU7026)， 将指数生长的HepG2细胞分2组：照射组、加药照射组(在照射前2h加人20IX 两组细胞同时进行4Gy的照射，收集照射后1、2、4h的细胞，消化离心，收集细胞，加入蛋白裂 解液，室温裂解后，离心，收集蛋白。Western H2AX(Serl39)蛋白表达 Blot检测Phospho—Histone 水平(15％SDS—PAGE凝胶电泳，O．22斗mNC膜其余步骤同上)，用B—actin作为内参。 1．6克隆形成率 取对数生长的HepG2细胞，常规消化，将细胞悬液作梯度倍数稀释，按每皿含600、2000个细 胞的梯度密度，分别接种于含5ml预温37。C的培养液的60ram培养皿中；使细胞分散均匀；分为3 组：未照射组，照射组(4Gy 照后，将培养皿移人CO：孵箱，在3