WRKY33转录因子基因沉默载体的构建.pdfVIP

维普资讯 南京农业大学学报 2008，31(3)：43—46 JournalofNanjingAgriculturalUniversity WRKY33转录因子基因沉默载体的构建 屈淑平，徐文龙，崔崇士 (东北农业大学园艺学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘要：参照拟南芥WRKY33转录因子基因序列设计引物，利用RT—PCR技术从大白菜中克隆了WRKY33基 因编码区460 bp的序列，利用双链RNA介导的基因沉默技术，构建WRKY33基因沉默植物表达载体，为进一步研究该基因在植物与 软腐病菌互作中的功能及其作用机制奠定基础。首先将 WRKY基因片段连接至 pUCm—T载体上 ，用 fI／BamHI和 fI／Xh01分别对 pUCm—WRKY载体进行酶切，得到 2个 WRKY基因片段 ；先后将其连接到 pBSSK—in载体上，构建成 pBSSKWRKY-in—WRKY载体 ，该载体中的2个 WRKY片段大小一致 ，反向重复；并用 SacI／ nI酶切 pBSSK—WRKY-in— WRKY载体得到 WRKY-intron—WRKY片段 ，连入表达载体pCAMBIA1301中，构建成该基因的沉默植物表达载体。 关键词：大白菜；WRKY33基因；基因沉默；载体构建 中图分类号：Q943．2 文献标识码：A 文章编号：1000—2030(2008)03—0043—04 Construction ofgenesilencingvectorharboringWRKY33gene QUShu—ping，XUWen—long，CUIChong—shi (CollegeofHorticulture，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：PCR primers were designed based on WRKY33 transcription factorofArabidopsisthaliana． The460 bp cDNA of WRKY33transcriptionfactorwasclonedrfom Brassicacampestrisssp．pekinensisusingRT—PCR．TheRNA interferencetechnology wasusedtoconstructgenesilencingvectorharborinWRKY33gene． Thisstudymayprovideabasicmatarialforfurtherstudieson thebio—functionofWRKY33andthemechanism ofsignaltransductioninducedbyErwinia inplant． Two460bpfragmentsofWRKY withPstI／BamH Iand fI／XhoI obtainedthroughdigestingpUCm—WRKY，thecombinationofvectorpUCm—Tandgene WRKY．wereconnectedintovectorpBSSK—intoofrm pBSSK—WRKY-in—WRKY，inwhichthetworfagmentswereinverseduplica— tion．Thetransfomr unitWRKY-intron—WRKY．gotbydigestingvectorpBSSK—WRKY-in—WRKYwithSacI／@nI，wasconnected intoexpressionvectorpCAMBIA1301． GenesilencingvectorharboringWRKY33 genewasconstructed， andthecombinedvector wouldbeemployed． Keywords：Brassicacampestrisssp．pekinens~；WRKY33gene；genesilencing；vectorconstruction WRKY转录因子是近年来发现的一类植物特有的转录调节因子，因在其N