乳糖诱导pET载体表达重组蛋白的研究.pdfVIP

( ) 第 25 卷第 1 期 南京师大学报 自然科学版 Vol. 25 No. 1 ( ) 2002 年 JOURNAL OF NANJ ING NORMAL UNIVERSITY Natural Science 2002 乳糖诱导 pET 载体表达重组蛋白的研究 吴一凡 ,张双全 ,高秀玉 ,刘晓宇 (南京师范大学生命科学学院 ,南京 ,210097) ( ) ( ) ( ( ) ) [摘要] 　以重组人B 淋巴细胞刺激因子 hBLyS 蛋白表达宿主菌株BL21 DE3 pET30 a / hBLyS 作为研究对 象 ,借助 SDSPAGE 分析方法 ,对于用乳糖诱导由 T7lac 启动子控制的重组目的产物的表达规律进行了优化研 究. 分析比较了诱导的起始阶段、所需的乳糖浓度和诱导持续时间等参数对重组产物表达的影响. 实验结果表 明,对于 T7lac 启动子控制的重组目的产物 ,乳糖可以作为诱导剂 ;在对诱导条件进行优化控制的前提下 ,乳糖 诱导目的产物的绝对表达量虽然不及 IPTG,但相对成本却比 IPTG 低得多 ,且没有毒性. 研究结果为乳糖作为诱 导剂应用于重组基因工程药物工业化生产提供了一定的参考. [ 关键词] 　乳糖 ,诱导 ,IPTG,大肠杆菌 ,SDSPAGE ( ) [ 中图分类号]Q78 , 　[文献标识码]A , 　[文章编号] 2001 0 　引言 美国Novagen 公司推出的pET 系列表达载体是一种高效的大肠杆菌表达系统[1 ] . 在 pET30 ( ) λ a 系统中 ,宿主菌 BL21 经噬菌体 DE3 溶源化后 ,后者的 lacUV5 强启动子及位于其下游的 T7RNA 聚合酶基因被整合到宿主菌的基因组DNA 中. 当目的基因被人为的克隆至pET 载体的 ( ) ( β 多克隆位点 T7lac 强启动子的下游 中后 ,宿主菌在非代谢性乳糖类似物 IPTG 异丙基 - - D - 巯基半乳糖苷) 的诱导作用下能产生大量的 T7RNA 聚合酶 ,后者特异性的识别 pET 表达载 体中的 T7 启动子序列 ,从而高效的表达目的重组蛋白. 由于 IPTG 不会被宿主菌利用 , 因此向 培养液中加入少量的 IPTG 就能对 lacUV5 和 T7lac 强启动子产生持久的诱导作用. IPTG 是非常高效的乳糖启动子诱导剂 ,但其只适用于实验室规模的小量样品制备 ,应用 于大规模发酵生产基因工程重组药物则有一定的局限性[2 ] :一方面 IPTG 对于人体具有潜在的 毒性 ,从安全角度而言并不合适 ;另一方面 , IPTG 较为昂贵 , 国际市场售价约为 14 美元/ g , 按 ( ) 3 通常的诱导使用剂量 0. 5 mmol/ L ,培养液的 IPTG 消耗量为 120 g/ m ,相当于 1 700 美元 ,如此 高的诱导成本对工业化生产是无法接受的. 为了寻找 IPTG 的替代物 ,我们尝试用乳糖作为诱导剂来启动 T7 RNA 聚合酶基因和目的 蛋白基因的转录 ,从而表达目的蛋白. 本文报道了以大肠杆菌 BL21 (DE3) 菌株为宿主细胞 , 以