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利用蚕豆根尖微核技术检测水质污染程度 罗怀勇 四川农业大学农学院，四川雅安（625014 ） E-mail ：lhy126.com 摘 要：本试验应用蚕豆根尖细胞微核技术对青衣江、　江和纸厂污水水质污染程度进行了 研究，分别测定了3 个水样的蚕豆根尖细胞微核千分率(MCN‰)及污染指数(PI),其中　江下 游采样点水样的微核率为19.6 ‰ ,青衣江采样点水样的微核率为 10.9 ‰, 纸厂污水采样点 水样的微核率为24.3 ‰ , 污染指数分别为1.96,1.09,2.43．结果表明青衣江水质已经存在着 轻度污染, 　江下游中度污染, 而纸厂污水重度污染。并对造成水质污染的原因、污染危害 及防治对策进行了讨论． 关键词：蚕豆根尖微核技术，微核率，污染指数 1 引言 蚕豆根尖细胞微核技术是一种以染色体断裂及纺锤体损伤等为测试终点的植物微核检 测方法，由于断裂后的片段不具有着丝点，到细胞分裂末期，断片流失在细胞质中成为微核。 实验证明，环境诱变因子的强弱与诱发的微核率成正比，因此可用微核率大小来表示诱变因 子的强弱。利用蚕豆根尖细胞微核技术监测水质污染有以下优越性：灵敏度高，可靠性强； 技术简单，易于操作，而且有显而易见的实用性；实验周期短，且蚕豆根尖细胞周期中大部 分时间处于对诱变剂敏感的间期，便于遗传毒性检测试验，精确度也比较高[1] 。目前，国内 学者运用该技术已开展了乌鲁木齐河、淮河、扬中市地表水，家居饮用水等水污染研究，以 及化学物质、汽车尾气、香烟焦油等有害物质环境污染研究等[2～6] 。本试验应用蚕豆根尖细 胞微核技术对水质进行了检测，测定了3 个水样的蚕豆根尖细胞微核千分率(MCN‰)及污染 指数(PI) 。本文的测定结果可为有关部门提供参考。 2 材料与方法 2.1 材料 蚕豆地方品种 2.2 水样 按采样方法分别在以下地点采取水样： 青衣江：彩虹大桥下 濆江：雅安宾馆旁 纸厂污水：纱龙纸业有限公司 2.3 方法 2.1.1 材料准备与处理 1.浸种催芽：选择无虫子、饱满的蚕豆种子放入盛有自来水的烧杯中，在 24 ℃恒温培 养箱中浸泡24h 。待种子吸胀后，将蚕豆种入锯木中，继续在24 ℃恒温培养箱中生长36-48h ， 至大部分初生根长至1-2cm 左右，根毛发育良好，即可用于诱导化学物质的处理。 -1- 2.待测物处理根尖：每一处理选择6-8 粒初生根生长良好一致的种子，放入盛有待测物 溶液的培养皿中，浸没根尖，加盖，在24 ℃培养24h 。 3.细胞恢复培养：倒掉处理液，种子用蒸馏水浸洗三次，每次2-3 分钟，再置入铺有湿 润滤纸的瓷盘中， 24 ℃恢复培养22-24h 。 2.1.2 取材、制片 1.固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下 1cm 长的幼根，用卡诺氏固定液固定 24 小时。 2.解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根，3-4 次，每次2 分钟，加入 1mol/L 盐酸浸没幼 根，放入60 °C 水浴锅中，酸解4-5 分钟，幼根软化为止。 3.染色：倒掉盐酸，将材料转入小培养皿中，加入染液卡宝品红，预染色24 小时左右。 4.压片：切取蚕豆分生组织于载玻片上，并切成几小段，滴1-2 滴染液染色，轻轻地盖 上盖玻片，注意不要产生气泡，用镊子头或铅笔的橡皮头端轻敲几下，再用拇指用力下压， 使细胞充分分散。 2.1.3 镜检观察与分析 1.镜检观察：低倍镜 （10 X ）观察后，选择细胞分布均匀，细胞无损的区域，再转到高 倍镜（40 X ）下观察记录细胞数和微核数。每处理观察3 个根尖。 2.微核率计算： 微核率（MCN‰）=微核个数/观察细胞总数×1000‰ 3 结果