化合物OCAM的体外抗肿瘤活性.docVIP

化合物OCAM的体外抗肿瘤活性 　　作者：柳旺艳,李娟,李岩,刘东艳,李静　　作者单位：吉林大学公共卫生学院，吉林长春 　　【摘要】 目的 研究化合物OCAM的体外抗肿瘤活性并初步探讨其作用机制。方法 采用MTT法、台盼蓝染色法和集落形成实验检测OCAM对体外培养的SMMC7721及H22肿瘤细胞的杀伤作用;用MTT法检测OCAM对HL7702人正常肝细胞的毒性作用;流式细胞仪检测OCAM对SMMC7721细胞的诱导凋亡作用和细胞周期变化。结果 与空白对照组相比较，OCAM从12.5mg/L到200mg/L剂量范围内对SMMC7721肝癌细胞均有不同程度的杀伤作用，最高抑制率达到70.99%。OCAM浓度为100mg/L时，即对H22肿瘤细胞产生杀伤作用，抑制率为47.49%。OCAM剂量为500mg/L时，集落形成抑制率达到100%。OCAM组的肿瘤细胞凋亡率和G0/G1期比例均高于空白对照组。结论 通过体外细胞试验证实OCAM具备较好的抗肿瘤活性和较低的毒性。 　　【关键词】 抗肿瘤作用;细胞毒作用;SMMC7721细胞株;MTT;流式细胞术 　　肿瘤的化学药物治疗是一种全身性治疗，在肿瘤综合治疗中占有很重要的地位，虽然目前已有许多抗肿瘤药物用于临床，对大多数肿瘤也有一定疗效，但仍然存在治疗效率不高、选择性差、毒副反应大及瘤细胞耐药等问题。寻找高效、低毒、特异的抗肿瘤药物仍是肿瘤药物治疗的重要课题。本文采用体外实验方法探讨金刚烷胺修饰物OCAM的体外抗肿瘤活性，为其进一步应用提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验药物 　　金刚烷胺修饰物OCAM由吉林大学公共卫生学院卫生检验教研室提供。 　　1.2 细胞株 　　人肝癌SMMC7721细胞、小鼠H22肝癌细胞和HL7702人肝细胞均为吉林省肿瘤医院肿瘤研究所提供。 　　1.3 试剂 　　RPMI1640培养液(GIBCO公司);胎牛血清(GIBCO公司);胰蛋白酶(DIFFICO公司);甲基偶氮唑蓝([3(4,5)dimethylthiazol2nyl]2,5diphenyltetrazoliumbromide，MTT，AMRESCO分装);氟尿嘧啶(5Fu，上海旭东海普药业有限公司)。 　　1.4 方法 　　1.4.1 MTT法检测OCAM对HL7702人正常肝细胞的毒性 　　将传代后第2天处于对数增殖期HL7702细胞，用含50mL/L小牛血清的RPMI1640培养液制成单细胞悬液，细胞以1×105个/孔的密度接种于96孔板，每孔中分别加入细胞悬液100ΜL，在体积分数50mL/L CO2，37℃，饱和湿度下培养24h后，实验组以100ΜL/孔加入质量浓度分别为750mg/L、500mg/L、250mg/L、100mg/L、50mg/L的化合物OCAM;阳性对照组和空白对照组分别加入100ΜL/孔5Fu(100mg/L)和RPMI1640培养液，每组设6个复孔，在570nm波长下用酶标仪测定吸光度(absorbance, A)，计算细胞毒百分率，用相应软件计算得出半数毒性浓度(mediallethaldose, TC50)。 　　1.4.2 MTT法检测OCAM对SMMC7721人肝癌细胞的抑制作用 　　按1.4.1方法检测质量浓度分别为200mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L、12.5mg/L的OCAM对SMMC7721人肝癌细胞的抑制作用，计算药物对肿瘤细胞抑制率(inhibitionrate, IR)，用相应软件计算得出半数抑制浓度(50% inhibitingconcentration, IC50)。 　　1.4.3 台盼蓝染色法检测OCAM对H22肿瘤细胞的抑制作用 　　将H22肿瘤细胞调至1×105个/mL，以0.05mL/孔接种于24孔板上，然后实验组加入0.05mL/孔化合物OCAM(质量浓度分别为1000mg/L、500mg/L、100mg/L、50mg/L);阳性对照组和空白对照组分别加入0.05mL/孔5Fu(100mg/L)和RPMI 1640培养液，每组设3个复孔。作用24h后，用4g/L台盼蓝染液染色，在显微镜下用血细胞计数板计数活细胞数和死细胞数，计算抑制率。 　　1.4.4 SMMC7721肿瘤细胞集落形成实验 　　将SMMC7721肿瘤细胞1500个/孔接种于6孔板。培养24h后依次加入2.0mL/孔化合物OCAM(质量浓度分别为750mg/L、500mg/L、250mg/L);阳性对照组和空白对照组分别加入2