山鸡椒ISSR扩增条件的优化.pdfVIP

一 36一 江苏农业科学 2011年第 1期 徐兴利，金则新，李钧敏，等．山鸡椒 ISSR扩增条件的优化[J]．江苏农业科学，2011(1)：36—38 山鸡椒 ISSR扩增条件的优化 徐兴利 ，金则新。，李钧敏 ，祈彩虹 ， (1．西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆北碚400715；2．台州学院生态研究所，浙江临海317000) 摘要：采用改进的SDS法提取山鸡椒基因组DNA，利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg 浓度、dNTP浓度、 模板DNA用量、7叼’DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化，得出了适用于山鸡椒ISSR分析的扩增条 件 ：10trLPCR反应体积，l×Taq酶配套缓冲液(200mmol／LTris·HC1，pH值8．8，100mmo~LKC1，1％TritonX一100， l00mmo~L(NH4)2s04，15mmol／LMgC12)，0．8UTaqDNA聚合酶，16ng模板DNA，6pmol引物，0．3mmol／LdNTP， 1．75mmol／LMg2 。 利用优化反应体系从 100个 ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对21个山鸡椒 个体的DNA进行扩增，共得到 107个位点，其中，91个为多态位点，多态位点百分率为85．05％，Nei指数为0．3613， Shannon信息指数为0．5221，表明山鸡椒的遗传多样性处于较高水平。 关键词：山鸡椒；ISSR；优化 ；遗传多样性 中图分类号：s567．901 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2011)01—0o36—03 简单重复序列 区间 (inter—simplesequencerepeat，IS— 术，因此，影响PCR效果的因素诸如牛血清 白蛋 白浓度、Mg2 SR)，是Zietkiewiez等…于 1994年创建的建立在 PCR基础上 浓度 、dNTP浓度 、模板 DNA用量、引物用量 以及 TaqDNA聚 的一种新的分子技术，它结合了SSR和 RAPD的优点，并由 合酶用量等均会影响ISSR的扩增结果。因此，为了获得稳定 于其具有引物开发费用低、DNA用量少、多态水平高等特 而可靠的扩增结果，在研究时都应先建立合适的反应体系并 点 ，近年来已广泛用于品种鉴定、物种多样性等相关领域 对其进行优化 。 的研究 。由于 ISSR技术也是基于 PCR的一种分子技 山鸡椒(Litseacubeba)，落叶灌木或小乔木，花、叶和果皮 主要提制柠檬醛的原料，供医药制品和配制香精等用，种子含 收稿 日期：2010—03—19 油约40％，为工业用油。全株可人药，有祛风、散寒、理气、止 基金项 目：浙江省 自然科学基金 (编号：Y507660)。 痛之效，主治感冒或预防感冒，果实入药 ，称 “毕澄茄”，可治 作者简介：徐兴利 (1986一)，男，重庆开县人，硕士研究生，从事植物 胃寒痛和血吸虫病 。本研究以山鸡椒的基因组DNA为 生态学研究。E—mail：xingli～xu@163．COB。 模板，探讨 ISSR—PCR反应体系中6种因素对扩增的影响， 通信作者：金则新，教授，从事植物生态学研究。E—mail：jzx@tze． 以期获得山鸡椒 ISSR反应的最佳体系，为山鸡椒遗传多样性 edu．en。 的分析奠定基础。 (上接第35页) suitsforallozymesandrandomamplifiedp