康氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究.pdfVIP

．- — — 378--—— 江苏农业科学 2011年第 1期 史国翠，尹文新，张 敏．康 氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究[J] 江苏农业科学，2011(1)：378—380 康氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究 史国翠 ，尹文新，张 敏 (延边大学农学院动物科学系，吉林龙井 133400) 摘要：以稻草和麸皮为主要原料，通过单因素试验优化康 氏木霉固态发酵产纤维素酶的条件，对氮源、接种量、麸 皮含量、含水量、发酵时间、发酵温度和初始pH值进行了研究。结果表明，最佳发酵条件 ：培养基氮源为 (NH)：S04、 麸皮添加量为40％、含水量为200％；接种量为7％；初始pH值为5．0；发酵时间为96h；发酵温度为30℃。 关键词：康 氏木霉；纤维素酶；固态发酵 中图分类号：TQ925 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2011)0l一0378—02 纤维素是 自然界中最广泛的一类碳水化合物，同时也足 1000mL，充分混匀，贮于棕色瓶中，室温放置 1周后使用。 地球上数量最多的可再生资源。通过植物的光合作用，地球 柠檬酸缓冲液：A液 (0．1mol／L柠檬酸溶液)：准确称取 上每年合成的植物生物总量约为 1×10“t…，而纤维素大约 CHO ·H。O21．014g，用少量蒸馏水溶解后定容至 占全球植物生物总量的50％ 。目前，纤维素只有--d,部分 1000mL；B液 (0．1mol／L柠 檬酸 钠 溶液 )：准 确 称取 得到了直接利用，绝大多数不仅被浪费，而且还造成一定程度 NaCHO ·2HO29．412g，用少量蒸馏水溶解后定容至 的环境污染。利用微生物发酵生产纤维素酶可将纤维素转化 1000mL。取上述A液27．12mL，B液22．88mL，充分混匀后定 为人类所需的能源、食物和化工原料，对合理利用纤维素生物 容至 100mL，即为0．05mo／／LpH值4．5的柠檬酸缓冲液。取 资源，克服环境污染，解决食物短缺和能源危机具有重大的现 上述A液20．5mL，B液29．5mL，充分混匀后定容至 100mL， 实意义。纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一类酶的总 即为0．05mol／LpH值5．0的柠檬酸缓冲液。0．51％羧甲基纤 称，它不是单种酶，而是起协同作用的多组分酶系。如果能利 维素钠(CMC)溶液：精确称取 0．51gCMC，用 0．05mol／LpH 用纤维素酶将农副产品和工业废料如糠醛渣、蔗糖渣、造纸废 值5．0的柠檬酸缓冲液定容至 100mL，用前充分摇匀。 液等纤维素材料转化成糖和蛋 白质，就有可能开辟饲料、发酵 1．2 试验 方法 工业原料和人类食品的新来源，不仅对传统农业是有力的补 1．2．1 固态发酵 将菌种接种到PDA培养基试管中，30℃ 充，而且同时还可 以变废为宝、消除公害和保护环境。 培养 3d后滴加 5mL无菌水，振荡制备菌悬液。将菌悬液接 种到固体发酵培养基中，30℃下培养，搅拌 1次／d，每次 1 材料与方法 5min。 1．1 材料 1．2．2 酶液的制备 固体 曲加等量的蒸馏水浸提 lh，浸提 1．1．1 ·供试菌种与辅料 康 氏木霉 由本课题组筛选获得 ；稻 液离心 10min(3500r／min)，上清液即为酶液。 草秸秆粉 (当地农户提供)，粉碎过40目筛；麸皮(市售)。 1．2．3 酶活力的测定 1．1．2 培养基 PDA培养基：称取 200g马铃薯，洗净，去 1．2．3．1 滤纸酶 (FPA)活力测定：取 0．5mL酶液加入到 皮，切成小块，加水 1000mL，煮沸 0．5h，纱布过滤，再加 1．5mL0．05mol／LpH值