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重组犬IFNγ在原核细胞中的高效表达.pdf
业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (5): 639~643
·研究论文·
重组犬 在大肠杆菌中的高效表达
1 2 1 1 1 1
海峰 李景荣 唐丽杰 范京惠 王玉玲 李一经 *
(1. 东北 业大学动物医学系，哈尔滨 150030 ；2. 黑龙江生物技术职业学院, 哈尔滨150030)
邾
： 基因，克隆到pMD 18-T 载体并测序鉴
摘要 提取Concavadin A 诱导培养的犬脾细胞总RNA ，经RT-PCR 扩增出犬
定，然后把 基因克隆到原核表达载体PJLA605 ，构建pRL-Ca 表达质粒；应用M9 培养基通过摇瓶发酵，确定诱导
时机和诱导表达时间。结果表明，工程菌pRL-CaI 在30 培养至 600 为 1.5 于42 诱导4 h ，菌体收获量湿重达20.0
g/L ，目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的32% ，外源基因在该基因工程菌中得到了高效表达。邾
： ；大肠杆菌
关键词 犬 ；高效表达
High Expression of Canine Recombinant Gene in
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ZHANG Hai-Feng LI Jing-Rong TANG Li-Jie FAN Jing-Hui WANG Yu-Ling LI Yi-Jing *
邾
Total RNA was isolated from canine spleen cells stimulated with Concavadin A and canine gene was amplified
by RT-PCR. The amplified fragment was cloned into pMD 18-T vector and sequenced, and then the cloned gene was inserted
into expression vector pJLA605. The recombinaant plasmid of pRL-Ca was constructed. The cell growth phases for induction
and inducing period were determined using shaking flask with M9 medium. The results showed that when induced at 42 for 4 h
after the cultivation of DH5琢(pRL-Ca ) in shaking flask reached to 1.5( 600) at 30 , 20.0 g of wet bacteria
per liter could be obtained and the derivative
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